纽莫康定B0合成基因簇腺苷化结构域蛋白的纯化及酶学性质研究开题报告
2020-05-24 12:34:42
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文 献 综 述 1. 纽莫康定b0简介 纽莫康定b0是抗真菌药物卡铂芬净的前体。
纽莫康定类棘白菌素化合物是merck公司科学家发现并命名的,生产菌为glarea. lozoyensis[1-2],主要有a0 和b0 两种有效产物。
通过对药效较好的b0修饰,得到一种水溶性半合成衍生物泊芬净( caspofungin ),商品名为赛克斯( cancidas )。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
1.本课题要研究或解决的问题 通过PCR方法克隆G. lozoyensis cDNA中负责合成纽莫康定B0六肽环的非核糖体肽合成酶(NRPS)中第6位腺苷化结构域(A结构域)基因片段,导入E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达;在较优的诱导产酶条件下,得到高纯度的目标蛋白。
2.拟采用的研究手段 1)利用PCR技术克隆G. lozoyensis第6位腺苷化结构域基因片段 2)构建腺苷化功能域重组质粒 3)优化诱导产酶(诱导剂浓度、诱导时间)的条件 4)纯化表达的蛋白质 5)研究产酶的酶学性质
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