重组大肠杆菌异源表达β淀粉酶的发酵优化与酶学性质研究开题报告
2020-05-26 20:24:50
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
1.1 研究背景
生物体由细胞构成,每个细胞由于酶的存在才表现出种种生命活动,体内的新陈代谢才能进行。生物体内含有数千种酶,它们支配着生物的新陈代谢、营养和能量转换等许多催化过程,与生命过程关系密切的反应大多是酶催化反应。酶的这些性质使细胞内错综复杂的物质代谢过程能有条不紊地进行,使物质代谢与正常的生理机能互相适应。若因遗传缺陷造成某个酶缺损,或其它原因造成酶的活性减弱,均可导致该酶催化的反应异常,使物质代谢紊乱,甚至发生疾病。
β-淀粉酶(β-amylase,ec3.2.1.2)又称淀粉β-1,4麦芽糖苷酶[1],糖原淀粉酶。其系统命名为α-1,4-葡聚糖-4-麦芽糖水解酶(α-1,4-d-glucan maltohydrolase)。它是一种外切糖化酶,作用于淀粉时从非还原性末端依次切开相隔的α-1,4键,发生沃尔登转位反应(walden inversion)产物由α-型变为β-型麦芽糖,故命名为β-淀粉酶[2-5]。其广泛存在于大麦、小麦、甘薯、大豆等高等植物[6-8]以及芽孢杆菌属微生物中,是啤酒酿造、饴糖(麦芽糖浆)制造的主要糖化剂。
2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
2.1研究内容
(1)学习基本的微生物培养发酵和酶工程理论知识及其操作。熟练掌握sds-page蛋白电泳,β-淀粉酶酶活测定,蛋白镍柱纯化过程,考马斯亮蓝法测定蛋白浓度,以及酶标仪和高效液相色谱等操作过程。
(2)对重组淀粉酶菌株进行单因素诱导条件优化,确定温度,诱导剂浓度,诱导时间对酶活的影响。
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