文 献 综 述

一、前言

虽然目前已鉴定的酶有 3700 多种，但是工业上能生产的酶仅有60多种，而真正作为催化剂用于工业规模生产的酶更少，只有 20多种^[1]。出现这种情况的原因主要有三个：首先很多酶本身的生产和纯化成本太高；其次大多数酶在生产条件下极易失活；再次自由酶难以回收重复利用。这三点致使酶的使用成本太高，限制了酶作为催化剂的大规模应用^[2]。因此我们需要将酶固定化，固定化酶稳定性高，易分散，易回收，重复使用性强。交联酶聚集体（CLEA）是一类新型的无载体固定化技术，因具有无需载体、制备简单、酶回收率高、成本低廉、操作和保存稳定性强等众多优点，已经成为酶固定化领域的研究热点^[3]。因此研究交联酶聚集体的制备意义重大。

二、脂肪酶CRL交联酶聚集体

2、1 脂肪酶的概述

脂肪酶的活性区域是由一个丝氨酸、一个天冬氨酸的残基和一个组氨酸（Ser-Asp-His）组成的”催化三联体”，其活性位点通常被一个同时具有亲水性和疏水性的α螺旋”盖子”（lid、flap或loop）结构覆盖。在水相中脂肪酶盖子上的亲水性部位朝外，使脂肪酶在水中具有良好的溶解性，在疏水性底物或有机溶剂的诱导下，盖子被打开，脂肪酶的活性位点及附近疏水区域暴露，不同来源的脂肪酶的”盖子”大小以及”盖子”打开后活性位点附近的疏水性区域大小不同。

2、2 脂肪酶的应用

脂肪酶的应用十分广泛，在现代食品工业中有非常重要的作用,过去几年中,由于酶在经济和技术上都有显著优势,所以其在传统食品生产工艺中的应用越来越广泛^[4,5]。各种不同的产品和加工过程包括果汁、烘焙、发酵、乳制品浓缩、乳酪加香、脂肪及油类去脂化等都可以应用流动的或固定化的CRL。在制药工业中也有重大作用，生物制药领域一个挑战性的任务就是建立一个脂肪酶催化的水解或合成活性化合物的体系。不仅可以在旋光异构体中催化原位外消旋作用,CRL也能催化合成大量药品,包括催化合成有光学活性的非甾醇类抗炎药（布洛芬、萘普生、苯酮苯丙酸）、潜在的抗病毒药卡波佛（可用于对抗HIV）、生物碱类的光学异构体合成、二级醇、抗生素、生化抑制剂和前药等。CRL由于具有（S）-立体定向性而在制药和农业化学制剂上有重要作用。此外,还广泛应用在生物材料、生物传感器、生物识别和生物降解等领域中。^[6]

研究表明，CRL固定在丙烯酸树脂上得到的固定化酶的酯化率则能达到96% ^[7，8] 。在不同沉淀剂或不同添加剂条件下的CLEAs 水解活力表现出很大差异，CRL用乙醇作沉淀剂比用(NH)₂SO₄、叔丁醇、丙酮、异丙醇效果好，且CLEAs 在环己烷中合成酯类效果明显优于游离酶。

2、3 酶的固定化