1. 毕业设计（论文）主要内容：

pkr（双链 rna 依赖性蛋白激酶）是先天免疫反应中一个重要的干扰素可诱导的抗病毒蛋白，是细胞内一种对病毒感染的广谱感受器。除此之外，pkr 在各组织细胞中均有组成性表达，参与了细胞生长、分化及肿瘤抑制等多个重要细胞生理活动。越来越多的研究表明pkr与多种疾病的发生有密切关系，pkr活性失调可能导致神经退行性变、癌症和炎症性疾病。因此，对pkr结构和功能的深入研究，将丰富对干扰素抗病毒免疫反应的机制的认识，并且有助于探究其在多种疾病中的作用，具有重大的临床意义。

基因组编辑是指对目标基因组位点进行靶向修饰，包括基因敲除、特异突变引入及定点转基因等，该技术在基因功能研究、人类疾病模型构建及新型基因治疗方案探索方面具有重要意义。crispr/cas9是近年兴起的基因编辑技术，可以高效快速方便地对特定基因进行编辑和敲除，是继锌指核酸内切酶（zfn）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（talen）”之后出现的第三代基因组定点编辑技术。建立基因敲除细胞模型是研究目的基因功能的一种常用而有力的方法，本毕业论文设计将利用crispr/cas9基因编辑技术，对pkr基因进行靶向敲除，研究在病毒感染时，pkr基因knock-out细胞抗病毒反应的异常及缺陷，进而发现该蛋白于其他相互作用蛋白的关系及在抗病毒反应中的作用机制。

2. 毕业设计（论文）主要任务及要求

1、查阅不少于15篇的相关资料，其中英文文献不少于3篇，完成开题报告。

2、设计引物sgrna，构建表达sgrna和cas9的质粒。

3、培养哺乳类动物细胞，并利用crispr-cas9技术建立zbp1, pkr基因knock-out细胞系，检测敲除效果。

3. 毕业设计（论文）完成任务的计划与安排

第1-2周：查阅相关文献资料，明确研究内容，了解课题的研究现状。确定方案，完成开题报告。

第3-10周：设计引物sgrna，构建表达sgrna和cas9的质粒。培养哺乳类动物细胞，将所构建的质粒导入细胞。

第11-14周： 将所构建的质粒导入细胞筛选得到阳性细胞系，并用抗体检测pkr蛋白的表达量，确定得到pkr knock-out细胞系。

4. 主要参考文献

[1]项光海，王皓毅.靶向核酸酶介导基因编辑技术的发展[j].生命科学,2015,27(1):12-19.

[2]夏君.抗病毒蛋白 pkr 的结构和功能[j].中国免疫学杂志 2013,29(2):205-209.

[3]谢 炯，夏 君，张佩芬,等.双链rna依赖性蛋白激酶及与其相互作用的蛋白质[j]. 细胞与分子免疫学杂志，2012，28(6)：660-662.