1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

随着世界石油供应价格的不断上涨以及温室效应带来的影响，近年来生物燃料呈现快速发展的势头。

美国科学家研究发现，丁醇是一种极具潜力的新型生物燃料，近年来备受人们的重视[1-2]。

作为一种新的生物燃料，丁醇能够降低温室气体的排放，符合绿色环保的要求，同时比乙醇具有更高的能量密度和燃料经济性[3]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

丙酮丁醇梭菌为厌氧菌，而gfp发光需要氧的参与，故需要调研文献以获得可以在无氧条件下发出绿色荧光的突变gfp基因序列，经由密码子优化，构建重组质粒后再转入丙丁梭菌中表达，并在紫外光或蓝光的激发下产生绿色荧光，从而更好地观察生物膜在丙丁菌生长的各时段分布情况。

丙酮丁醇梭菌中有其自身的一套限制性内切酶系统，对外源性dna序列会进行切割致使转入的质粒失去活性。

为解决这个问题，拟采用将重组质粒在dh5α中先进行扩增，然后将其热击转化入top10(含有pan2质粒)进行甲基化，使构建的以psy8为载体的新质粒不被丙丁菌的限制性酶切系统破坏，最后通过电转化的方法将带有优化后的绿色荧光蛋白基因的psy8质粒导入丙丁梭菌，并使其表达且在激发光下显现绿色荧光。