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耐辐射奇异球菌来源糖化酶的克隆、表达和酶学性质研究开题报告

 2020-06-04 20:26:51  

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

文 献 综 述 1、糖化酶的介绍 1.1 糖化酶的定义 糖化酶,又称葡萄糖淀粉酶[glucoamylase,系统命名为淀粉 α-1,4- 葡聚糖葡萄糖水解酶,α-1,4-glucanglucohydrolase(ec.3.2.1.3)], 是一种具有外切活性的酶,它能把淀粉、糊精、糖原等从非还原性末端水解α-1,4- 葡萄糖苷键,而得到终产物β-d-葡萄糖,也能缓慢水解α-1,6- 葡萄糖苷键或α-1,3- 葡萄糖苷键,转化为葡萄糖[1-3]。

1.2糖化酶的作用方式 糖化酶的底物专一性较低,它除了能从淀粉链的非还原性未端切开a-1.4键处,也能缓慢切开a-1.6。

因此,它能很快的把直链淀粉从非还原性未端依次切下葡萄单位,在遇到1.6键分割,先将a-1.6键分割,再将a-1.4键分割,从而使支链淀粉水解成葡萄糖。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

1.基本内容: 耐辐射奇异球菌来源糖化酶的克隆、表达和酶学性质研究 2.拟解决的关键问题: ①糖化酶基因的获得; ②糖化酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达; ③糖化酶的提纯和酶学性质研究 3.研究的方法与技术路线: 酶学性质研究: ①最适反应温度及热稳定性 : 在不同温度下按照标准方法测定酶活,以酶活最高者为 100%.热稳定性试验中测残余酶相对活力,以未保温的酶液的酶活为 100%。

②酶的最适反应 ph 值及 ph 值稳定性 : 将酶液分别用不同浓度梯度的缓冲液稀释,按标准方法测酶活力。

分子克隆基本流程图:

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