羰基还原酶CprCR催化性能提高的定点突变分子改造开题报告
2020-06-04 20:27:51
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文 献 综 述 1. 研究背景 1.1 羰基还原酶 羰基还原酶在酶学分类上属于短链脱氢/还原酶类,以nadph为辅酶,催化还原许多在生理和药理上有活性的羰基化合物,并且大多数都为单亚基的胞内酶[1]。
羰基还原酶是重要的生物催化剂,能将潜手性的底物转化成具有手性的重要医药中间体[2-3],因此在不对称合成的有机反应中起着重要的作用。
许多手性醇可以通过羰基还原酶对潜手性酮的立体选择性还原得到。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
一、主要研究内容 为了获得更好的工业及理论应用价值,本研究以能作用于该生物催化还原反应的酶cprcr为研究对象,拟系统研究酶的蛋白质结构与催化调节机制之间的关系,通过对催化区域中关键氨基酸实施突变,构建相应的突变菌株,以获得催化活性较高的突变酶。
二、本论文研究手段 本研究从近平滑假丝酵母中克隆得到羰基还原酶cprcr,并将其构建在pet-28a表达载体上,在大肠杆菌中表达。
通过催化区域中关键氨基酸实施定点突变构建突变菌株,得到了催化活性提高的羰基还原酶cprcr的重组大肠杆菌,并利用全细胞催化1-boc-3-哌啶酮合成s-nbhp。
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