利用毕赤酵母分泌表达重组乙酰基木聚糖酯酶AXE开题报告
2020-06-06 09:51:49
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文 献 综 述
1.乙酰木聚糖酯酶
乙酰木聚糖酯酶(acetyl xylan esterases,axes),它能够水解乙酰化木聚糖中的木糖残基上的2位和3位的o乙酰基[1] 。在植物细胞壁中广泛存在着一些连接阿拉伯糖基、乙酰基等基团的聚合物,尤其在硬木当中,乙酰化木糖的成分高达60-70%[2]。硬木木聚糖以o-乙酰-4-o-甲基葡萄糖醛酸木聚糖的形式存在,聚合度在150~200之间,通常在木糖的 c-3 位点高度乙酰化[3]。这些被乙酰化的木糖成分使植物细胞壁有足够的完整性,大大增加了细胞壁的刚度和强度,同时也另植物细胞壁的生物降解性能大大降低。而axe可以使乙酰基团对内切木聚糖酶的空间阻碍作用消除掉,增强内切木聚糖酶对木聚糖的亲和能力,促进乙酰木聚糖的高效降解。因此降解细胞壁不但取决于纤维素酶、半纤维素酶的活力,更取决于axe和其它侧链降解酶的协同作用[4,5,6] 。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
1 本课题要研究或解决的问题
本课题以大肠杆菌为出发菌种,通过一系列分子操作得到axe目的序列,选择分泌型表达载体,继而转化酵母菌(一般选用原生质球法或电击转化法,后者较为常用且效果也好),诱导培养后检测外源蛋白是否正确表达。并检测表达量的大小和相酶活的大小。
2 拟采用的研究手段
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