酿酒酵母单倍体制备与其发酵研究

陈鹏

（南京工业大学，江苏省，南京，211800）

摘要：诱导酵母产孢进而获得单倍体是进行酵母遗传学和育种工作极为关键的一步,它既是性状遗传分析所必需, 又可为杂交作好亲本的准备。对于实验室用标准二倍体酿酒酵母的孢子产生条件, 国内外均有报道。孢子的获得必须要提供适当的产孢条件,酿酒酵母营养体在营养缺乏等饥饿条件下, 经过减数分裂由二倍体变为单倍体, 形成子囊。在常用的酵母产孢培养基中没有一种产孢培养基能够适用于所有的酵母产孢。为此, 在几种不同生孢培养基的条件下进行酿酒酵母的生孢实验, 选择一种最适培养基进行单倍体分离, 并采用发酵法筛选出一株性能良好的单倍体。实验研究了二倍体酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌株的孢子形成和分离条件，并获得了相应的单倍体细胞。对获得的单倍体菌株进行发酵实验，并测定其酒精发酵性能，为融合实验做好铺垫。

关键词: 微生物; 酿酒酵母; 产孢条件; 单倍体

诱导酵母产孢进而获得单倍体是进行酵母遗传学和育种工作极为关键的一步,它既是性状遗传分析所必需, 又可为杂交作好亲本的准备。对于实验室用标准二倍体酿酒酵母的孢子产生条件, 国内外均有报道。孢子的获得必须要提供适当的产孢条件,酿酒酵母营养体在营养缺乏等饥饿条件下, 经过减数分裂由二倍体变为单倍体, 形成子囊。在常用的酵母产孢培养基中没有一种产孢培养基能够适用于所有的酵母产孢。为此, 在几种不同生孢培养基的条件下进行酿酒酵母的生孢实验, 选择一种最适培养基进行单倍体分离, 并采用发酵法筛选出一株性能良好的单倍体。

为构建具有双亲优良性状的高产酒精酵母融合子，采用酿酒酵母单倍体作为亲本是一种有效的手段，能降低融合后重组子的回复突变率，增加融合子的稳定性。因此，酿酒酵母单倍体的制备至关重要。工业生产上常用的二倍体酿酒酵母产孢能力弱，生孢条件复杂且产孢率低，这给孢子的利用以及融合工作造成了困难。为满足融合的需求，有必要研究出发菌株的孢子形成和分离条件。本实验研究了酿酒酵母单倍体的形成条件，并利用酵母的二倍体营养细胞和单倍体子囊孢子的温度耐受力差别，高温杀灭营养细胞，分离得到单倍体，通过摇瓶发酵实验测定单倍体菌株的发酵性能。

1．酿酒酵母子囊孢子