1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

一 背景 解脂耶氏酵母是最广泛研究的非常规酵母之一，是作为用于生产基于脂肪酸的生物燃料和生物产品的含油细胞工厂平台。

油解酵母解脂耶氏酵母（yarrowia lipolytica）具有生产和储存高等真核生物脂肪细胞三酰甘油的优异能力，除了脂质的生产和生物修饰，解脂耶氏酵母菌能够在特定的发酵条件下分泌低分子量的次生代谢产物如柠檬酸和多元醇以及细胞外酶。

编码解脂耶氏酵母（yarrowia lipolytica）主要三酰甘油合成酶的两个基因是dga1和lro1。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

一 研究目标： （1）突破解脂耶氏酵母缺乏有效选择标记与遗传多样性的限制 （2）研究解脂耶氏酵母产油途径中关键基因lro1对产油途径的具体影响，对影响解脂耶氏酵母产油的单因素进行优化，通过cre/loxp切除系统与kan r 选择标记，成功删除lro1基因，获得lro1基因双倍体缺失的酿酒酵母突变株。

二 研究内容： 设计与解脂耶氏酵母三酰甘油合成酶lro1基因orf两侧序列同源的删除组件引物，以质粒pug6为模板进行pcr构建带有kan r 选择标记的删除组件。

通过醋酸锂转化法将删除组件导入解脂耶氏酵母，采用g418筛选阳性克隆子，将质粒psh65转入阳性克隆子。