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摘 要

近年来，雷公藤甲素作为研究的热点，其毒副作用，尤其是生殖毒性受到了广泛关注。本课题以PGC-1α为研究对象，探究雷公藤甲素对附睾及精子的毒副作用及其可能的分子机制。取20只ICR雄性小鼠，适应性喂养后，随机分成模型组与对照组。采用腹腔注射雷公藤甲素的方式对模型组小鼠进行药物干预，给药剂量120μg/（kg·d），给药体积0.1ml/10g，对照组小鼠则腹腔注射生理盐水，给药体积0.1ml/10g，每日一次。14天后，取双侧附睾称重计算附睾指数，Hamp;E染色观察组织形态，精子染色与计数检测精子质量，免疫组化法检测附睾组织中PGC-1α和8-OHdG的表达，附睾组织匀浆法测定氧化应激指标（MDA、GSH、H₂O₂）。实验结果表明，雷公藤甲素干预后，小鼠附睾指数显著下降，精子数量减少，畸形率增加，MDA，H₂O₂含量以及8-OHdG的表达增加，而GSH活性及PGC-1α的表达降低。说明雷公藤甲素可能通过抑制附睾微环境中线粒体膜上PGC-1α的表达和抗氧化物酶活性，破坏附睾微环境抗氧化系统，使氧化应激水平升高，从而造成附睾损伤，最终导致精子成熟障碍并影响男性（雄性）的生育能力。

关键词：雷公藤甲素 附睾 氧化应激 PGC-1α 8-OHdG

Abstract

In recent years, triptolide as a research hotspot, its side effects have been widely concerned, especially reproductive toxicity. In this study, PGC-1 α was used to study the toxic effect of triptolide on epididymis and spermatozoa, and its possible molecular mechanism. Twenty male ICR mice were randomly divided into model group and control group after adaptive feeding. Triptolide was injected intraperitoneally in the model group, the dosage was 120 μ g / (kg · d), the dosage volume was 0.1ml/10g, the control group was intraperitoneally injected with normal saline, the dosage volume was 0.1ml/10g, once a day. After 14 days, the index of epididymis was calculated by weighing the bilateral epididymis, the histomorphology was observed by H amp; E staining, the sperm quality was detected by sperm staining and counting, the expression of PGC-1 α and 8-OHdG in epididymis was detected by immunohistochemistry, and the oxidative stress indexes (MDA, GSH, H₂O₂) were measured by epididymis tissue homogenate method. The results showed that the weight of epididymis decreased, the number of sperm decreased, the deformity rate increased, the content of MDA, H₂O₂ and the expression of 8-OHdG increased, but the activity of GSH and the expression of PGC-1 α decreased after triptolide intervention. It is suggested that triptolide may destroy the antioxidant system of epididymis microenvironment by inhibiting the expression of PGC-1 α and the activity of antioxidant enzyme on the mitochondrial membrane, and increase the level of oxidative stress, thus causing damage to epididymis, eventually leading to sperm maturation disorder and affecting male fertility.

Keywords：triptolide; epididymis; oxidative stress; PGC-1α; 8-OHdG

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 不育症现状 1

1.2 氧化应激简介 1

1.3 PGC-1α简介 3

1.4 8-OHdG简介 4

1.5 雷公藤甲素简介 4

第二章 实验材料与方法 6

2.1实验材料 6

2.1.1实验动物 6

2.1.2实验试剂 6

2.2实验方法 6

2.2.1动物分组及给药 6

2.2.2小鼠附睾指数测定 6

2.2.3、附睾组织形态学分析 6

2.2.4精子数量及形态测定 7

2.2.5附睾氧化应激生化指标检测 7

2.2.6免疫组化检测PGC-1α、8-OHdG的表达 7

2.2.7 数据统计分析 8

第三章 结果 9

3.1雷公藤甲素对附睾指数的影响 9

3.2雷公藤甲数对精子数量及形态的影响 10

3.3雷公藤甲素对附睾组织形态学的影响 11

3.4雷公藤甲素对氧化应激生化指标的影响 11

3.5雷公藤甲素对附睾组织中PGC-1α、8-OHdG的影响 12

第四章 讨论与结论 14

参考文献 16

致谢 18

第一章 文献综述

1.1 不育症现状

随着我国二胎政策的开放和人们生育意愿的提高，对男性不育问题的关注也越来越多。据统计，不育问题困扰着15%-20%的育龄夫妻，其中50%-70%不育的原因来自于男方，而且这个趋势还在逐年增加^[1]。WHO预测，不孕不育将成为21世纪继肿瘤、心脑血管疾病之后的第三大顽疾，因此，不孕不育症人群的生殖健康情况是全世界重点关注的公共卫生问题。谈雯^[2]等人在分析众多不育患者病因后，发现附睾损伤是造成男性不育的重要原因之一。而造成附睾损伤的因素主要有环境污染、职业问题以及长期服用药物以至毒素蓄积对生殖器官乃至生殖系统造成伤害。

附睾在精子成熟过程中起着重要的作用，包括精子获得前进运动和使卵子受精的能力。在睾丸中产生的精子并不具有运动能力和受精能力，还需在附睾管内转运过程中与附睾微环境分泌蛋白相互作用，进而使其体内外受精能力、直线前进能力、穿过透明带与卵细胞结合且融合能力逐渐增加。同时附睾还起到屏障的作用，能够阻止精子进入附睾上皮，从而避免发生自身免疫反应^[3]。附睾损伤后，会使精子的成熟过程受到影响，最终造成精子发育不完全、精子畸形、DNA损伤等情况的发生^[4]。现有的研究^[5]发现，高水平的氧化应激（OS）能造成附睾损伤引起精子成熟障碍，最终影响男性（雄性）的生育能力。

1.2 氧化应激简介

氧化应激（OS）是指机体在遭受有害刺激时，体内活性氧（ROS）的产生过多，造成机体氧化系统和抗氧化系统失衡，从而导致机体组织的结构和功能受到损伤^[6]，与多种疾病的产生有关。正常情况下，低水平的氧化应激对男性生殖生理功能的调节非常重要，在精子获能、顶体反应及激素产生等方面发挥着重要作用^[7]。但高水平的氧化应激却会出现负调节作用^[5]，会对体内的组织和细胞造成一定的危害，引起细胞代谢受阻、能量失调、蛋白质结构发生改变等，进而影响到细胞、组织、器官乃至系统的功能^[8]。

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