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摘 要

近年来，三文鱼及其制品掺假现象时有发生，其中将虹鳟鱼（Oncorhynchus mykiss）替代为大西洋三文鱼（Salmo salar）的情况日益严重。本研究根据大西洋三文鱼和虹鳟鱼线粒体基因中保守序列设计特异性引物，建立一种基于双重PCR（duplex PCR）的大西洋三文鱼和虹鳟鱼物种鉴定方法。通过优化双重PCR的反应体系，扩增出大西洋三文鱼和虹鳟鱼均清晰的凝胶电泳条带。结果表明：建立的大西洋三文鱼和虹鳟鱼双重PCR鉴定方法具有良好的特异性，经过市售样品鉴定表明该方法具有可行性。本研究旨在建立大西洋三文鱼和虹鳟鱼的双重PCR鉴定方法，为大西洋三文鱼和虹鳟鱼物种鉴别掺假检测提供可靠的技术手段和执法依据。

关键词：大西洋三文鱼 虹鳟鱼 双重PCR 掺假

Detection of Atlantic salmon and rainbow trout by Duplex PCR

Abstract

In recent years, adulteration of salmon and its products has occurred from time to time, among which the phenomenon of replacing S. salar with O. mykiss has become increasingly serious. Two sets of specific primers were designed based on the conserved mitochondrial gene sequences of S. salar and O. mykiss, which were used to establish a duplex PCR method to detect ingredients derived from S. salar and O. mykiss in commercial products. Regular and clear S. salar- and O. mykiss-specific bands were amplified simultaneously by optimizing the reaction system of duplex PCR. The results show that the duplex PCR method for S. salar and O. mykiss has good specificity, and the identification of commercially available samples shows that the method is feasible. The purpose of this study is to establish a duplex PCR identification method for S. salar and O. mykiss, and provide reliable technical methods and law enforcement basis for the identification of adulteration of S. salar and O. mykiss species.

Key words: Salmo salar; Oncorhynchus mykiss; duplex PCR; adulteration

目 录

摘要 I

ABSTRACT II

目录 III

第一章 引言 1

1.1 三文鱼和虹鳟鱼 1

1.2 基于DNA的鉴定方法 2

1.2.1 DNA条形码 2

1.2.2 荧光PCR 3

1.2.3 多重PCR 4

1.3 目的和意义 5

第二章 材料与方法 6

2.1 样品采集 6

2.2 试剂与仪器 7

2.3 实验方法 7

2.3.1 DNA提取 7

2.3.2 特异性引物的设计 8

2.3.3 普通PCR 8

2.3.3 荧光PCR 9

第三章 结果与分析 10

3.1 双重PCR体系优化 10

3.2 双重PCR验证体系特异性 11

3.3 双重PCR鉴定市售样品 13

第四章 结论与展望 15

4.1 结论 15

4.2 展望 15

参考文献 17

致谢 19

第一章 引言

1.1 三文鱼和虹鳟鱼

Salmon的音译为三文鱼，准确来说是鲑鱼和鳟鱼的统一名称——鲑鳟鱼。鲑鳟鱼属鲑科鱼，在世界上其种类数量约有67种 [1]，较为常见的种类见表1。而其中产量在鲑科鱼产量中占数较多的是大西洋三文鱼和虹鳟鱼 [2-3]。

表1 常见鲑鳟鱼种类名称

三文鱼是高价值、营养丰富的鱼类之一。其鱼肉紧实有弹性，纹理清晰呈白色，色泽则是鲜红色或橘红色，肉质鲜嫩，在美食界有“冰海之皇” [4]的美誉。它富含n-3系列的不饱和脂肪酸，其中的EPA、DHA是人体内重要的营养物质。三文鱼所含的氨基酸高于其他鱼类，能满足广大消费者的营养需求，深受他们的喜爱 [5-6]。

大西洋三文鱼（Salmo salar）别名大西洋鲑鱼，为鲑科中的鲑属（Salmo），是冷水性洄游鱼类 [7]。大西洋三文鱼的外形看起来是梭形的，其牙齿是发育完全的。当其生活在淡水时，身上就会出现红色及蓝色的斑点；当可以看到其银蓝色斑点出现在身上时，就是它们生活在海里时出现的特点。它们身体侧边的线上可以看到的黑色斑点，是它们比较容易辨认的特点。雄鱼会在生产繁殖的时候，身体表现为浅绿或红色。大西洋三文鱼作为一种世界性养殖鱼类，据记载大西洋北部是其原来的栖息场所。在国内，“挪威三文鱼”是该鱼在我国水产品市场上的名字，养殖产量较低也是大西洋三文鱼在我国的一个现状特点，销售价格较高，但消费者非常喜欢三文鱼生鱼片料理、三文鱼沙拉及其它三文鱼加工产品等，都是以其作为原料制作出来的。

虹鳟鱼（Oncorhynchus mykiss）又被叫作彩虹鳟鱼，为鲑科鱼，大马哈鱼属（Oncorhynchus），是塘养鱼中的冷水性鱼类。它的身体表现为纺锤状，稍微侧扁。“虹鳟”这个名字的由来，是因为小黑斑遍布它的鱼体，还可以看到一条红色条带在它身体侧边。温度低的淡水是虹鳟鱼主要生活的环境，北美洲北部、太平洋西岸都是它的原产地 [8]。

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