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摘 要

目前，基于DNA技术的牛源性成分定性检测技术已很成熟，但定量技术仍存在很多问题。本实验方法和目的是，选用一种牛肉产品类型，根据样品的特征，选用传统的SDS方法进行DNA的提取，并通过提取方法的优化和改良，得到提取质量良好、提取效率稳定的最佳DNA提取方法，并运用于实际样品中，验证方法的稳定性，看是否能建立稳定的牛肉及其肉制品DNA提取方法。

总DNA提取效率分析可以得出每100ng样品中提取到的总DNA ng数的部分平行数据间存在显著差异，观测值波动范围较大。总DNA提取效率大小为：100%生牛肉样品lt;5%加热牛肉样品lt;5%生牛肉样品lt;100%加热牛肉样品。

牛DNA提取效率分析可以得出5%加热牛肉样品组内相对稳定。牛DNA提取效率大小为：5%加热牛肉样品lt;5%生牛肉样品lt;100%加热牛肉样品lt;100%生牛肉样品。推测牛肉含量越少，牛DNA提取效率越低。对牛肉的加工（加热）会导致牛DNA提取效率降低

关键词：DNA提取效率；DNA质量；电泳；荧光PCR

Extraction and Analysis of DNA from Beef

ABSTRACT

At present,the qualitative detection technology of bovine components based on DNA technology has been very mature,but there are still many problems in quantitative technology. The aim and method of this experiment is to select a kind of beef product type, in term of the characteristics of the sample,select the traditional SDS method to extract DNA,and through the optimization and improvement of the extraction method,the extraction quality is good. The best DNA extraction method with stable extraction efficiency was applied to the actual samples to verify the stability of the method to see if a stable DNA extraction method for beef and its meat products could be established.

The analysis of total DNA extraction efficiency shows that there are significant differences in some parallel data of the total DNA ng number extracted from each 100ng sample,and the observed values fluctuate widely. The total DNA extraction efficiency was as follows:100% raw beef sample lt; 5% heated beef sample lt; 5% raw beef sample lt; 100% heated beef sample.

The analysis of bovine DNA extraction efficiency showed that it was relatively stable in 5% heated beef sample group. The extraction efficiency of bovine DNA was as follows:5% heated beef sample lt; 5% raw beef sample lt; 100% heated beef sample lt; 100% raw beef sample. It is speculated that the less beef content is,the lower the extraction efficiency of bovine DNA is. The processing (heating) of beef will lead to the decrease of extraction efficiency of bovine DNA.

.Key Words: beef; DNA extraction efficiency;DNA quality;electrophoresis; fluorescent PCR

目录

摘 要 I

ABSTRACT II

第一章 文献综述 1

1.1引言 1

1.2 DNA提取方法 2

1.3牛源性成分鉴定 3

1.3.1 聚合酶链式反应（PCR） 3

1.3.2 PCR-RFLP 4

1.3.3实时荧光PCR 4

1.3.4 DNA条形码 5

1.4 研究的意义及目的 5

第二章 实验方法 6

2.1实验材料和试剂 6

2.1.1材料 6

2.1.2 试剂 6

2.1.3 仪器与设备 6

2.2 样品处理 6

2.2.1样品类型 6

2.2.1样品准备 7

2.3 采用的研究手段 7

2.3.1 DNA提取方法 7

2.3.2 DNA质量的确定 8

2.3.3 总DNA提取效率分析 9

2.3.4 标准曲线的建立 9

2.3.5 荧光PCR扩增 9

2.3.6 牛DNA提取效率分析 9

第三章 实验数据及分析 10

3.1 DNA提取质量的确定 10

3.2 总DNA提取效率分析 12

3.2.1总DNA提取效率稳定性 12

3.2.2总DNA提取效率比较 14

3.3绘制标准曲线 14

3.4牛DNA提取效率分析 15

3.4.1牛DNA提取效率稳定性 15

3.4.2牛DNA提取效率比较 18

第四章 结论与展望 19

4.1 结论 19

4.2 展望 19

参考文献 20

致谢 22

第一章 文献综述

1.1引言

近些年发表了很多报告都涉及牛肉DNA提取的不同方法^[1]。比如说：酶法、化学法或热方法。根据目标的不同，对于相同或不相同的样品的分析方法，可能采取不同的方案。其中牛肉DNA质量和数量直接影响可以使用的方法，因为某种方法可能是高度敏感或不是特别敏感的，因此可能需要不同的DNA量和纯度后才会被认为是达到足够的目的。选择合适的DNA提取方法至关重要，为了得到可靠的结果，必须要考虑目标和下游的应用^[2]。

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