论文总字数：20047字

摘 要

癌症是全球人类健康事业中的一大难题，胃癌更是由于其高异质性，经过验证的药物靶点少，导致大量抗胃癌药物在研发后期的临床验证中才被淘汰，造成了时间和成本的巨大浪费。本实验通过将AGS胃癌细胞株注射入斑马鱼胚胎体内，测功建立了斑马鱼胃癌异种移植模型，并对抗癌药物阿帕替尼、多西他赛及瑞格菲尼的抗肿瘤细胞增殖活性进行了研究。实验结果表明，三种抗癌药物都能对斑马鱼体内的AGS细胞增殖和转移产生抑制作用，其中阿帕替尼和瑞格菲尼对AGS胃癌细胞的抑制作用最明显。将本实验完成了利用斑马鱼模型对抗癌药物进行筛选，这对药物研发初期进行高通量筛药，降低成本的浪费带来了希望。该模型还有望用于精准用药领域，即利用人源肿瘤细胞建立异种移植模型，实现个体化用药的治疗方法。

关键词：斑马鱼 异种移植 胃癌 阿帕替尼

Anti-tumor activity of apatinib in gastric cancer

xenograft model in Zebrafish

Abstract

Cancer is a major problem in the global human health cause.And gastric cancer is more because of its high heterogeneity and the lack of verified drug targets, leading to the elimination of a large number of anti-gastric cancer drugs in the clinical validation in the later stage of research and development,resulting in a huge waste of time and cost. In this study, AGS gastric cancer cell lines were injected into zebrafish embryos to establish a xenograft model of gastric cancer in zebrafish, and the anti-tumor cell proliferation activities of apatinib, docetaxel and regorafenib were studied. The results showed that all three anti-cancer drugs could inhibit the proliferation and metastasis of AGS cells in zebrafish, among which apatinib and regorafenib had the most obvious inhibitory effect on AGS gastric cancer cells. Zebrafish was used to screen anti-cancer drugs in this experiment, which brought hope for high-throughput screening in the early stage of drug development and reducing cost. This model is also expected to be used in the field of precision medicine, that is, the establishment of xenograft model with human tumor cells to achieve personalized medicine.

Key words: zebrafish；xenograft；gastric；cancer；apatinib

目录

摘 要 I

Abstract II

目录 III

第一章 文献综述 1

1.1胃癌 1

1.1.1胃癌的发展现状 1

1.1.2癌症治疗方法的现状及展望 1

1.2斑马鱼与生物医学研究 1

1.2.1斑马鱼介绍 1

1.2.2斑马鱼在医学研究中的应用 2

1.3斑马鱼肿瘤异种移植模型 3

1.3.1肿瘤异种移植模型 3

1.3.2斑马鱼异种移植模型 4

1.4抗肿瘤药物的研究进展 4

1.4.1抗肿瘤药物简介 4

1.4.2阿帕替尼 5

第二章 材料与方法 6

2.1实验材料 6

2.1.1实验试剂 6

2.1.2实验仪器 6

2.1.3实验动物 7

2.2实验方法 7

2.2.1细胞培养 7

2.2.2细胞标记及活力测定 8

2.2.3异种移植模型的建立 8

2.2.4给药方法 9

2.2.5荧光拍照及定量 9

2.2.6摸索斑马鱼对阿帕替尼、多西他赛、瑞格菲尼的最大耐受剂量 9

2.2.7数据统计 9

第三章 结果与讨论 11

3.1实验结果 11

3.1.1斑马鱼胃癌异种移植模型的细胞最佳注射量 11

3.1.2斑马鱼对阿帕替尼、多西他赛、瑞格菲尼的最大耐受剂量 12

3.1.3阿帕替尼、多西他赛、瑞格菲尼对胃癌细胞增殖的抑制作用 16

3.2讨论 17

第四章 结论与展望 18

4.1结论 18

4.2展望 18

参考文献 19

致 谢 23

第一章 文献综述

1.1胃癌

1.1.1胃癌的发展现状

近年来，胃癌已成为世界范围内最常见的肿瘤之一，发病率位居恶性肿瘤第五^[1]。亚洲是全球胃癌高发区，尤其在中国，胃癌占所有癌症发病率的四分之一^[2]，也是与癌症相关的死亡的第三大原因。据估计，中国每年有40万新诊断病例和30万死亡病例^[3]。全球胃癌的长期生存率虽然有了显著的提高，但它仍然是全球癌症负担的一个关键因素。

1.1.2癌症治疗方法的现状及展望

由于胃癌具有高异质性，胃癌的复发率也较高，25%的术后患者可能出现淋巴结转移。此外，血管生成对肿瘤的生存和生长至关重要，因为新的微血管的建立为肿瘤细胞增殖提供了营养。近年来晚期胃癌患者的平均存活率仍不到12个月,总体5年生存率低至只有20%^[4]。虽然靶向药物在治疗癌症领域有了应用，但目前缺少被验证的胃癌靶点，以及胃癌的高异质性和其他未知机制导致的化学不敏感性或化学耐药^[5]，以含氟尿嘧啶化疗为主的综合治疗仍是进展期胃癌的主要治疗策略^[4]。因此，为提高胃癌患者的生活质量，开发新药以及建立针对现有药物的个性化治疗策略成为主要的挑战。

1.2斑马鱼与生物医学研究

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