论文总字数：14474字

摘 要

目的：建立LC-MS/MS方法测定大鼠肝组织匀浆中TAT101的含量。

方法：色谱柱：CHIRALPX IE柱（250 mm4.6 mm，5 µm，S/N：85325）；流动相： A相：乙腈80%B相水20%，加0.1%甲酸水溶液，流速：0.9 mL/min；MS源：ESI，Positive；TAT101 m/z 587.200/500.200 TAT107（内标）m/z691.300/439.100

结果：

1. TAT101在50.0~50000 ng/mL浓度范围内，药物浓度与药物/内标峰面积比值符合线性回归方程。
2. TAT101精密度均以批内和批间测定的相对标准偏差表示，结果显示批间和批内精密度和准确度均符合要求。

结论：本方法能较好测定TAT101的含量，专属性强，灵敏度高，结果准确。

关键词：TAT101 TAT107 LC-MS/MS 大鼠肝组织匀浆

Abstract

Objective：To establish a Lc-ms/ms method to determine the content of TAT101 in rat liver tissue homogenate.

Method: chromatographic column: chiralpx ie column (4.6 mm (mm,5µm,s/n:85325), mobile phase: a phase: acetonitrile 80%b phase water 20%, plus 0.1% formic acid aqueous solution, Flow rate: 0.9 ml/min;ms Source: esi,positive TAT101 TAT107 (internal standard)

Result : The ratio of drug concentration to drug/TAT101 Peak area was in line with linear regression equation in 50.0~50000 ng/ml concentration range. The precision of TAT101 is indicated by the relative standard deviation between the batch ,the results show that both the precision and the accuracy of the batch are in accordance with the requirements.

Conclusion：This method can better determine the content of TAT101, the specificity is strong, the sensitivity is high, the result is accurate.

Keywords:TAT101；TAT107；LC-MS/MS；Tissue Homogenate

目 录

第一章 概述 1

1.1液质联用技术介绍 1

1.1.1液质联用技术的发展历程 1

1.1.2液质联用技术基本原理 1

1.1.3液质联用技术的应用 2

1.1.4液质联用技术的不足和需要改进的地方 4

1.2关于疟疾 6

第二章 实验目的和日期 7

2.1实验目的 7

2.2实验日期 7

第三章 实验实施 8

3.1实验材料 8

3.1.1标准品和内标 8

3.1.2试剂 8

3.1.3仪器 9

3.2实验过程 9

3.3样品制备 10

3.4肝组织匀浆样品的处理 11

3.5质谱和色谱条件 12

3.6方法学验证 13

第四章 实验结果 15

4.1方法学研究结果 15

4.2方法学验证结果 17

结论 20

参考文献 20

附表和图

表 1 试剂来源及批号 8

表 2 仪器型号及其生产厂家 9

表 3 混合标准系列溶液配制 10

表 4 标准曲线及质量控制样品的制备 11

表 5 稀释质控（QC）样品的制备 11

表 6 样品及内标的色谱检测条件 12

表 7 样品及内标（TAT107）的质谱检测条件 12

表 8LC-MS/MS法测定TAT101在大鼠肝组织匀浆中的标准曲线数据 18

表 9 精密度和准确度 18

表 10 LC-MS/MS法测定肝组织匀浆样品的批内、批间精密度和准确度 19

图 1 TAT101标准溶液色谱图 15

图 2 线性回归方程1 16

图 3 线性回归方程2 16

图 4 线性回归方程3 17

第一部分 概述

1.1液质联用技术介绍

1.1.1液质联用技术的发展历程

液相色谱-质谱联用技术是将液相色谱和质谱结合起来，这种方法已经成为药物研究的重要手段。质谱的开发历史最早出现在20世纪初。新一代的LC-MS起始于70~80年代，热喷雾使这种技术具备了商业价值。直到90年代，LC-MS的才有了商用价值。^[1]液相色谱-质谱联用技术广泛用于药物及其代谢产物的研究，液相质谱串联具有独特的优势，是药物研究发展趋势HPLC是分离复杂体系最有效分析工具之一，MS是一种高灵敏度检测器。我们一直努力简化质谱，可以越来越简便，越来越自动化。这是我们发展目标。

2000年：HPLC占15%，GC-MS占5%，LC-MS占80%。^[2]

1.1.2液质联用技术基本原理

LC-MS/MS技术的重点是液相色谱和质谱仪器之间的接口问题，如果液相色谱的流动相直接进入质谱的高真空区，质谱系统就会很容易被破坏。^[3]接口目的主要有：将流动相样品气化，或除去流动相分子。^[4]目前常用的LC-MS系统主要有两种分类方式：第一类是根据质量分析器分类，包括四级杆、傅里叶变换质谱等；第二类是根据离子源进行分类，包括大气压电离、等离子体喷雾、热喷雾和动态快原子轰击等。这些方法成功解决了接口的问题。其中热喷雾是通过液相流出的液体经过毛细管时经过加热然后被喷出，形成带电的雾滴，雾滴逐渐变小，发生厂解析电离，接下来进入质谱分析。目前广泛应用的大气压离子源主要有大气压化学离子化、电喷雾离子化和离子喷雾离子化。^[5]电喷雾（ESI）这种方法适用于大多数药物的定性定量研究。刘超等用LC-ESI/MS方法测定饮品中的邻苯二甲酸酯，用LichrospherC-18柱，流动相用甲醇-水，流动速度1ml/min，质谱采用选择离子检测模式。^[6]

相比起色谱，质谱可以检测到待测物的结构信息，色谱的优势在于可以分离，这样可以把两者的优势结合起来。质量分析器是质谱的核心。液质联用技术，特别是电喷雾技术适用于检查生物大分子，电喷雾适用于热不稳定的、强极性的、难挥发的化合物，再加上高效液相色谱的分离能力，复杂的混合物也能有好的结果。QMS四级杆是4根杆构成的，带有直流电压，当一组质荷比不同的例子进入它时，不是所有离子都能通过，满足条件的离子才能通过四级杆，达到检测目的。QIT是由环形电极和呈双曲面形端盖电极组成，呈离子陷，通过改变电压，从而得到质谱图。Q-TOF是由四级杆、飞行时间质谱组成的串联式质谱，分别具有各自的优势。^[7]目前国内QMS用的比较多，国外QIT较多。内标法是LC-MS/MS分析生物样品的常用方法，加入内标的目的是为了补偿损失，要选择理化性质与待测物差不多的物质来做内标，例如可以使用同位素，或者结构类似的化合物，目前更倾向于同位素内标，因为更准确。内标的浓度也是很重要的，待测物交换反应越大，标准曲线线性范围越高，内标浓度就应该越高。张丽芳等比较了内标法和外标法测定血浆中罗红霉素，最终确定液质联用以内标法测定血浆中罗红霉素。^[8]朱群英等通过同位素内标-液质联用法检测猪肉中苯二氮卓类药物残留，同时测定了几类苯二氮卓类药物。^[9]结果证明其方法适用。

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