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摘 要

一种简单，灵敏，可靠的高效液相色谱（LC-MS/MS）法得到开发和验证，并且用此方法来测定beagle血浆中所含有氯苯那敏及应用到其药代动力学的研究。精确量取100μl比格犬血浆溶液，加入10μl内标溶液（200ng/ml多潘立酮）混合摇匀，加入50μl用饱和碳酸钠碱化的血浆溶液，再加入400μl萃取剂（甲基叔丁基醚），涡旋震荡5min后，20000g×10min，4℃离心10min，取上清液300μl，真空浓缩装置挥干，残渣加100μl乙腈复溶，涡旋震荡5min后，20000g×10min，4℃离心10min，取上清液80μl放入进样小瓶中，进样 2μl。实验证明这个方法具有较高的特异性，测定血浆中氯苯那敏的浓度，具有灵敏度较高，选择性高，可靠性高的特点。结果表明这个方法能够成功应用于检测氯苯那敏在beagle犬体内的药代动力学。

关键词：氯苯那敏 LC-MS/MS 药代动力学

Kinetics of chlorpheniramine beagle dogs Pharmacokinetics

Abstract

A simple and sensitive high performance liquid chromatography (LC-MS / MS) method been developed and validated to determine beagle plasma chlorpheniramine. After taking 100μl of plasma was added 10μl of internal standard solution (200ng / ml solution of domperidone) mix, basified with saturated sodium carbonate added 50μl plasma, plus 400μl extraction agent (methyl tert-butyl ether), vortexed 5min, 20000g × 10min, 4 ℃ centrifugation 10min, the supernatant 300μl, vacuum concentration apparatus evaporated to dryness, the residue reconstituted 100μl acetonitrile, vortexed after 5min, 20000g × 10min, 4 ℃ centrifugation 10min, the supernatant 80μl into injection vials in, 2μl injection. LC-MS / MS method, of chlorpheniramine matrix effects (n = 6) in dog plasma, the method has a high specificity, accurate determination of the plasma concentration of chlorpheniramine, high sensitivity . The method was successfully applied to the determination of chlorpheniramine dynamics in beagle dogs in vivo pharmacokinetics.

Keywords: Chlorpheniramine ; LC-MS/MS; Pharmacokinetics

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 氯苯那敏简介 1

1.2 氯苯那敏的药效及药理作用 1

1.3药代动力学的意义 3

1.3.1药物代谢动力学研究在新药发现中应用 3

1.3.2药物代谢动力学在制剂学研究中的应用 3

1.3.3药物代谢动力学在中药现代化中的应用 3

1.3.4药物代谢动力学在毒理学研究中的应用 3

1.3.5药物代谢在新药设计中的作用 4

2.1材料与仪器 5

2.1.1主要试剂 5

2.1.2主要仪器 5

2.2氯苯那敏与对照品溶液配制 6

2.3血浆样品的处理 6

2.4质谱条件 6

2.5方法学验证 8

2.5.1方法特异性 8

2.5.2血浆中氯苯那敏标准曲线的制备及定量下限的测定 8

2.5.3提取回收率与基质效应试验 8

2.5.4精密度与准确度试验 9

2.5.5稳定性和稀释 9

2.5.6残留效应 10

2.6药代动力学和统计分析 10

第三章 数据处理 11

3.1色谱条件 11

3.2血浆样品预处理 11

3.3方法学验证 12

3.31方法特异性 12

3.3.2血浆中氯苯那敏标准曲线的制备及定量下限的测定 13

3.3.3提取回收率和基质效应 15

3.3.4精密度与准确度试验 18

3.3.5样本稳定性考察 19

3.3.6储备液稳定性考察 19

3.3.7进样残留实验 21

3.4药代动力学应用 22

3.4.1血药浓度-时间数据 22

3.4.2药代动力学参数结果 23

第四章 结论与展望 24

参考文献 25

致 谢 27

第一章 文献综述

1.1 氯苯那敏简介

氯苯那敏通用化学名为N, N-二甲基-γ-（4-氯苯基)-2-吡啶丙胺顺丁烯二酸盐，通常我们又称它扑尔敏^[1]，它的化学结构式见下图1。

图1：化学结构式

分子式:C₂₀H₂₃ClN₂O₄，分子量:390.9 。

通常我们在使用受试药物的时候，都会有固定的形式。比如说将它配制成马来酸盐^[2]溶液的形式，一般情况下它的外观为白色或者类白色结晶粉末。它的物理性质是无臭、味稍微有点苦，在水中的溶解度极高、在96%的乙醇的溶液中也能相溶，微溶于乙醚溶液，熔点是131-135℃。温度高时有升华的现象出现，升华物有特殊晶形的鉴定，保存在黑暗的地方。药品没有按照要求保存混有其他物质时，受到阳光照射会慢慢由白色转为淡黄色，并散发出刺激性的气味。

1.2 氯苯那敏的药效及药理作用

受试药物通常用于过敏性鼻炎^[3]、感冒和鼻窦炎^[4,6]及过敏性皮肤疾患如荨麻疹、过敏性药疹或湿疹、血管神经性水肿、虫咬所致皮肤瘙痒^[7,10]。氯苯那敏是H₁,受体阻断剂，用来降低感冒症状和流感以及过敏性疾病的早期临床治疗^[11,12]。

通常情况下受试药物不能大量使用，它在体内不易吸收^[13,14]，拥有比较低的血药浓度，在国内还没有报道有相关其在人体内的药代动力学研究。在这项研究中，采用高效液相色谱-串联法，检测了试验药物片剂在Beagle犬体内的药代动力学和相对生物利用度。希望能够在临床用药上提供比较有科学性的参考数据。虽然国内已有报道^[11,12]有关测定受试药物的血药浓度，通过文献检索可以发现其方法比较麻烦，比较容易出现样品在两次萃取后再使用盐酸等混入杂质的问题。这次实验采用LC-MS/MS的研究方法，以乙睛和甲酸，水等为流动相，利用甲基叔丁基醚分两次分别提取(在碱性条件下得到的)样品，受试药物的提取回收率有了很大的提高，这种方法简单便捷。实验证明这种研究方法具有高灵敏度、高准确性，高可靠性和良好的精密性，成功测定了受试药物的血药浓度、人体药代动力学和试验制剂和对照标准制剂在药物的吸收程度和速度的冲击学差异的研究^[13,14]。

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