论文总字数：19983字

摘 要

为了研究大鼠体内桃叶珊瑚苷的药代动力学和组织分布，开发了一种高效液相色谱-电喷雾串联质谱法（HPLC-ESI-MS/ MS）。生物样品通过甲醇蛋白沉淀法（其中含有0.05％甲酸）制备。所述分析物通过反相C-18柱，在MRM模式下，用三重四极串联质谱仪来监测前体到产物的离子跃迁m/z 。在正离子模式下，桃叶珊瑚苷的离子峰[M-NH4] m/z为364.3→149.0，胡黄连苷-II（IS）的离子峰[M-NH4] m/z为 530.3→183.1。在1-1000 ng/mL的浓度范围内，标准曲线具有良好线性。桃叶珊瑚苷的定量下限（LLOQ）为1 ng/mL。这种方法已经被成功地应用于桃叶珊,瑚苷在大鼠体内的药代动力学和组织分布研究。目前的结果揭示了草本植物的药物代谢动力学行为，并为桃叶珊瑚苷在大鼠脑组织的存在提供了新的证据。实验数据将对临床应用和传统的中国医药与环烯醚萜苷有效成分的进一步研究有所帮助。

关键词：桃叶珊瑚苷 HPLC-ESI-MS/MS 药代动力学 组织分布

Preclinical pharmacokinetics study of Aucubin

Abstract

To enable an investigation of pharmacokinetics and tissue distribution of Aucubin in rats, a high-performance liquid chromatography–electro spray ionization tandem mass spectrometry(HPL-ESI-MS/MS) method was developed for the simultaneous quantitative determination of the compound. Biological samples were prepared by a simple protein precipitation with methanol (containing 0.05% formic acid). The analytes were separated by a C18 reversed phase column and detected with a triple quadrupole tandem mass spectrometer in the multiple-reaction monitoring (MRM) mode to monitor the precursor-to-product ion transitions of M/Z 364.3→149.0 for Aucubin and M/Z 530.3→183.1 for Picroside-II (IS) in positive ionization. Good linearity of each calibration curve was produced over the concentration range of 1-1000 ng/mL.The lower limit of quantification (LLOQ) was 1 ng/mL for the three analytes. This method was successfully applied to the pharmacokinetic and tissue distribution studies of Aucubin in rat. The current results revealed pharmacokinetic behaviors of the herb compound and provided novel evidence of the presence of Aucubin in rat brain. The acquired data would be helpful for the clinical application and further studies of Traditional Chinese Medicines with active ingredients of Iridoid Glycosides.

Key Words: Aucubin; HPLC-ESI-MS/MS; Pharmacokinetics; tissue distribution

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1桃叶珊瑚苷的基本性质 1

1.2桃叶珊瑚苷的药理及药效作用 2

1.2.1抗病毒作用 2

1.2.2抗炎作用 2

1.2.3抗微生物活性 3

1.2.4抗氧化作用及延缓衰老作用 3

1.2.5抗骨质疏松作用 3

1.2.6抗毒性作用 3

1.3桃叶珊瑚苷的研究现状 3

1.4药代动力学的意义 4

1.4.1药代动力学研究在新药发现中应用 4

1.4.2药代动力学在药理学研究中的应用 4

1.4.3药代动力学在制剂学研究中的应用 4

1.4.4药代动力学在中药现代化中的应用 4

1.4.5药代动力学在毒理学研究中的应用 5

第二章 材料和方法 6

2.1材料与仪器 6

2.1.1主要试剂 6

2.1.2主要仪器 6

2.2标准溶液和质量控制（QC）样本的制备 6

2.3血浆样品预处理 7

2.4仪器和LC-MS/MS分析条件 7

2.5方法学验证 8

2.5.1特异性 8

2.5.2线性和最低定量限（LLOQ） 9

2.5.3提取回收率和基质效应 9

2.5.4精密度和准确度 10

2.5.5稳定性和稀释 10

2.5.6残留效应 10

2.6药代动力学和统计分析 11

第三章 结果与讨论 12

3.1质谱和色谱条件的优化 12

3.2血浆样品预处理 12

3.3方法学验证 13

3.3.1特异性 13

3.3.2标准曲线和LLOQ 13

3.3.3提取回收率和基质效应 14

3.3.4精密度和准确度 14

3.3.5稳定性 15

3.3.6残留效应 16

3.4药代动力学的应用 16

第四章 结论 18

参考文献 19

致谢 21

第一章 文献综述

桃叶珊瑚苷是车前科类植物的代表成分，它在自然界的分,布相当广泛。桃叶珊瑚苷 (Aucubin )，也可称它作为“珊瑚木苷”，它的化学名称为β-D,-吡喃葡 萄糖苷，它是植物次生代谢产物的一种，其相对分子质量为346.33，是一种环,烯醚萜,苷,化合物。环烯,醚萜苷，尤其是桃叶珊瑚苷，已被证明是在大量中国传统医药（TCM），如熟地黄，杜仲，车前草和毛蕊花等中的有效成分，这些草药具有很高的药用价值，并且在内分泌，心血管，免,疫和神经,系统中有广泛的药理和药效作用。桃叶珊瑚苷具有降解血压，保护肝脏等器官，抑制癌症以及缓解疼痛等多种功效，它是自然界中一种重要的活性物质。它可以抑制乙型 ,肝炎病毒DNA 的复制，其具体的机理为促进 干细胞的再生，以此达到此功效。桃叶珊,瑚苷的苷元及其多聚体是一种抗,菌素，它们可以有效抑制细菌的活性，甚至杀死细菌。桃叶珊,瑚苷在日,用品、化学化工、医药等行业应用广泛。虽然桃叶珊瑚苷的临床应用已被报道，但是大量的研究是和它的药理学行为，作用机制相关，只有少数论文是和它的药代动力学特征相关。本研究课题主要针对桃叶珊瑚苷的临床前药代动力特性进行了相关研究，并开发了一种HPLC-ESI-MS/MS法，旨在为含桃叶珊瑚,苷类药品的研,发及生,产提供参,考依据。

1.1桃叶珊瑚苷的基本性质

桃叶珊瑚苷形态上是白色的针状结晶，几乎不溶于某些有机溶剂如乙醚、氯仿及石油,醚等，但可溶于乙醇、水及甲醇。由于桃叶珊瑚苷的苷,键容易被酸,水解断裂，所以其在酸中很不稳定。利用TLC、HPLC可以研究一些因素对桃叶珊瑚苷的影响，实验发现，在过程中实验温度、贮存环境以及氧化作用对桃叶珊瑚苷的稳定性影响较大，所以应该在低温(一般在-50℃)条件下、并在很短的时间内完成分离提取操作，之后再进行真空干燥，进行密,封避光保存，这样可以尽最大可能保证桃叶,珊瑚苷处于一种相对稳定的状态。

1.2桃叶珊瑚苷的药效及药理作用

1.2.1抗病毒作用

通过动物实验可以证明桃 叶珊瑚苷具有抗病,毒作用。用0.2 mL·kg-1·d-1四氯化碳给小鼠灌 胃后，环己 烯巴比妥引起的小鼠的睡 眠时间被缩短，空白,生理盐水组、给药四氯化 ,碳组以及四氯化碳和桃叶,珊瑚 苷联合 给药组的睡 眠时间分别为：24.8 ± 8.8 min 、66.5 ± 9.5 min和27.0 ± 3.2 min。此外，当比格 犬处于蘑菇毒 素中毒的状态时，桃叶珊瑚苷可以用来对其进行解毒作用。桃叶珊瑚苷可以促进大鼠体内鹅膏 蕈碱的排泄，此结论被Lee 等学者的实验证明，而单独给药组的排泄 速度只有联合给药组的排泄 速度的70%，这说明了（1）鹅膏 蕈碱引起的肝脏中G2细胞的RNA聚合,酶活性 的降低同样可以被桃叶珊,瑚苷抑制（2）由于鹅膏蕈碱没有与牛 胸,腺DNA结合的能力，而桃叶,珊瑚苷能够与其结合。因而我们有理由认为桃叶珊瑚苷可能的,解毒机制之一是RNA聚合,酶活性的降低。

1.2.2抗炎作用

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