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摘 要

建立了以高聚物色谱柱快速、简单地分离分析传统中药材葛根中的葛根素和大豆苷元的高效液相色谱法，目前该方法未见报道。结果表明，以聚苯乙烯二乙烯基苯（PS-DVB）为基质的MKF-RP-HH高聚物色谱柱（300 mm×7.8 mm，5 μm，150121-RP-J83）；流动相为超纯水（A）和甲醇(B)，等度及梯度洗脱；检测波长为250nm；流速1.0 mL/min；进样量20 μL；柱温30℃：

（1）葛根素峰及大豆苷元峰的出峰时间随甲醇浓度的升高而提前；

（2）大豆苷元在低于70%B的浓度下不出峰；

（3）分离葛根素及大豆苷元的最佳分离条件为条件12，即：0-15min，40%B；15-20min，40-90%B；20-50min，90%B。

关键词：高聚物色谱柱 葛根素 大豆苷元 高效液相色谱

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ABSTRACT

This paper establish a polymer chromatographic column HPLC method that is fast and simple to separation and analyze the puerarin and daidzein of traditional Chinese medicine pueraria and prime and daidzin yuan HPLC method (the method has not been reported) and optimizing the chromatographic conditions.Column selection polystyrene divinylbenzene (PS-DVB) as a matrix polymer MKF-RP-HH type column (300×7.8nm, 5 μm, 150121-RP-J83).The mobile phase was UP-water (A) and met-hanol (B),isocratic and gradient elution.Detection wavelength was set 250nm;flow rate 1.0mL/min; injection volume was 20μL; column temperature was 30℃. The result shows that:

(1) the retention time of puerarin and daidzein with the concentration of methanol in advance.

(2) daidzein has no peak in lower 70% concentration of B under the condition.

(3) best conditions to separate puerarin and daidzein from pueraria is the condition 12: 0-15 min, 40% B; B 15-20 min, 40-90%; 20-50min,90%.

Key words: polymer column; puerarin; daidzein; HPLC

目录

摘 要 I

ABSTRACT II

第一章 前言 1

1.1 高效液相色谱的简介 1

1.1.1 高效液相色谱仪 1

1.1.2 紫外检测器 2

1.2 葛根素及大豆苷元的简介 3

1.3 高聚物色谱柱简介 5

第二章 实验内容 7

2.1 实验目的 7

2.2 主要仪器与试剂 7

2.3 色谱条件 7

2.4 对照品的制备 7

2.5 样品的制备 7

2.6 流动相的制备 7

第三章 实验结果与讨论 8

3.1 葛根素的条件优化 8

第四章 结论与展望 14

4.1 结论 14

4.2 展望 14

参考文献 15

致谢 17

第一章 前言

1.1 高效液相色谱的简介

高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）又称作高压液相色谱、高速液相色谱。其具有高效、高速、高压、高灵敏度的特点。根据分离机理的不同，可分为：液-液分配色谱、液-固吸附色谱、离子交换色谱、离子对色谱、亲和色谱、空间排阻色谱（凝胶色谱），电色谱等。高效液相色谱法可以对中药材中各复杂成分进行快速的分离分析。

1.1.1 高效液相色谱仪

高效液相色谱仪一般可分为主要的五个部分：

①梯度淋洗装置

②高压输液泵（流量控制系统）

③进样系统

④分离柱

⑤检测系统

①梯度淋洗装置：梯度淋洗装置分为低压梯度和高压梯度两种方式。这两种方式均可以使流动相的组成按设定的程序实现连续变化。低压梯度是使用一个高压泵，通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例混合，再由高压泵输入进色谱柱，混合器位于高压泵前，混合过程是在低压状态进行；而高压梯度则是利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入混合器，混合后进入色谱柱，混合器位于高压泵后。

②高压输液泵：高压输液泵是高效液相色谱仪的重要部件之一。常用的高压输液泵有两种，分别是恒压泵和恒流泵。目前在高效液相色谱仪中主要采用的是恒流泵中的机械往复柱塞泵。

③进样系统：由于高效液相色谱的流路处于高压工作状态，故对进样装置的要求较高。在进样准备状态，定量管处于常压状态；以进样器进样后，将阀芯旋转60°，此时进样阀呈进样状态，定量管处于高压状态（即与系统相连），流动相将定量管中的试样带入色谱柱。目前最常使用的进样装置为高压六通进样阀。

④分离柱：目前最为常用的分离柱是硅胶基质的反相色谱柱：C₁₈柱，但本研究使用的是pH适用范围更广，易清洗、可循环利用的、以苯乙烯-二乙烯基苯微球为填料的新型高聚物分离柱。

⑤检测系统：高效液相色谱中可以使用多种类型的检测器，如，紫外检测器、示差折光检测器、荧光检测器、电化学检测器等。本研究采用的检测器为紫外检测器^[1]。

1.1.2 紫外检测器

近几年来，随着高效液相色谱的迅猛发展，高效液相色谱法已被广泛应用，更由于其能对高沸点有机化合物、生化试样及天然产物等结构复杂的物质进行快速、高效的分离及分析，使其已成为一种十分重要的分析方法。目前已有约80%的有机化合物可被检测出来^[2]。

使用高效液相色谱法需根据检测样品的性质，选用不同的检测系统（检测器）。紫外检测器是目前为止应用最为广泛的检测器，由于其对大部分有机化合物都有响应，以及灵敏度高，波长可变，易于操作等特点，使其成为高效液相色谱仪的标配检测器。又因其对流动相脉冲和温度变化的不敏感，使其可用于梯度洗脱。

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