论文总字数：19040字

摘 要

基因技术革命是继工业革命、信息革命之后对人类社会产生深远影响的一场革命。它在基因制药、基因诊断、基因治疗等技术方面所取得的革命性成果，极大地改变了人类生命和生活的面貌。

基因工程一般包括四个方面的基本内容：一是取得符合人们的要求的DNA片段，这种DNA片段被称为“目的基因”；二是将目的基因与质粒或病毒DNA连接成重组DNA（质粒和病毒DNA称作载体）；三是把重组DNA引入某种细胞（称为受体细胞）；四是把目的基因能表达的受体细胞挑选出来。

本文主要以H7N9为目的基因考察基因的PCR扩增反应、与载体的连接及转入感受态细胞、阳性单克隆筛选的过程，并在此基础上探索基因合成的便捷方法，通过基因全合成实现基因的分子改造和人工组建正成为一种实验室常规手段,因此,建立一种能够在相对低廉和短时间内准确和高效地设计和合成长片段基因的方法十分重要。

关键词：H7N9 PCR 连接 转化 阳性单克隆筛选

Abstract

Gene technology revolution is another revolution that has a profound impact on human society after the industrial revolution and the information revolution . It is a revolutionary achievement in the technical aspects gene pharmaceuticals, gene diagnosis and gene therapy achieved greatly changed the face of human life and living.

Genetic engineering generally includes basic four aspects: First, get in line with the requirements of the people of DNA fragments, which DNA fragments are known as "gene of interest"; Second, the target gene with a plasmid or viral DNA recombinant connected DNA (plasmid and viral DNA called vectors); Third, the recombinant DNA into certain cells (called receptor cells); fourth is the receptor cells expressing the target gene selected.

This paper mainly on H7N9 gene PCR-amplified, and ligated to the vector which with the carrier connection the competent cell, monoclonal positive screening process, based on this and explores a convenient method of gene synthesis . Gene modification or artificial construction through in vitro total gene synthesis is becoming more acceptable, and the ability to efficiently and accurately synthesize long DNA sequences at low cost and in short time is, therefore, becoming increasingly important .

Key words: H7N9 ;PCR ;Connection ;Transformation ;Monoclonal positive screening

目 录

摘 要 I

Abstract II

目 录 III

第一章 文献综述 1

1.1 H7N9概述 1

1.1.1 禽流感简介 1

1.1.2 H7N9简介 1

1.2 基因合成方法 2

1.2.1 化学合成法 2

1.2.2 人工合成法 2

1.3 本课题的立题意义和研究内容 2

1.3.1 立题意义 2

1.3.2 研究内容 3

第二章 H7N9基因合成及其连接、转化 4

2.1 前言 4

2.1.1 PCR技术的基本原理 4

2.1.2 PCR反应的五要素 4

2.2 实验材料 6

2.2.1 实验仪器 6

2.2.2 实验试剂 6

2.3 实验方法 7

2.3.1 引物的设计与分段 7

2.3.2 第一轮PCR反应扩增 9

2.3.3 第二轮PCR反应扩增 11

2.3.4 H7N9与载体的连接 12

2.3.5 H7N9与载体的转化 13

2.4 结果与讨论 13

2.4.1 第一轮PCR产物检测图 13

2.4.2 合并片段回收图 14

第三章 H7N9阳性克隆筛选和质粒提取 17

3.1 前言 17

3.2 实验材料 17

3.2.1 实验仪器 17

3.2.2 实验试剂 18

3.3 实验方法 18

3.3.1 阳性单克隆筛选 18

3.3.2 质粒的提取 20

3.4 结果与讨论 21

3.4.1 阳性单克隆筛选结果分析 21

3.4.2 测序结果分析 22

3.5 本章小结 22

1. 结论与展望..............................................................................21

4.1结论..............................................................................................................21

4.1.1 PCR扩增 23

4.1.2 H7N9与载体的连接及转化 23

4.1.3 阳性单克隆筛选 23

4.2 展望 23

参考文献 25

致 谢 27

文献综述

1.1 H7N9概述

1.1.1 禽流感简介

流行性感冒病毒一般可分为三种：A型、B型和C型。其中B型和C型一般只在人群中传播，很少传染到其他动物，危害并不很大。

禽流感[1]则属于A型，可在野马、家禽、猪、鲸、马和海豹等动物体内传播。这种病毒表面的蛋白质分为H和N两大类：H是血细胞凝集素（Hemagglutinin），其作用有如病毒的钥匙，用来打开及入侵人类或牲畜的细胞；N是神经氨酸（Neuraminidase），能破坏细胞的受体，使病毒在宿主体内自由传播。

请支付后下载全文，论文总字数：19040字