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摘 要

一种免疫球蛋白M检测试剂盒的研制，该试剂盒是使用免疫比浊法下经过与不同厂家的抗体，在不同比例下的缓冲配置成。随后经过定标，全性能检测，临床比对等一系列实验操作。根据抗体生产者的分类,通过不同比例的缓冲、稳定试验和质量控制确定一系列可能改变的指标的临床试验作为一种科学的理论和早期的治疗方法,可以作为早期的临床诊断,为今后的实验奠定基础。

关键词:免疫球蛋白M；免疫比浊法；检测试剂盒；缓冲液

Development of an Immunoglobulin M Detection kit

Abstract

Development of an immunoglobulin M detection kit, the kit is used under the immunoturbidimetric

method through different manufacturers of antibodies, in different proportions of buffer configuration.After calibration, scanning, detection and a series of experimental operations.According to the classification of antibody producers, clinical trials with different proportions of buffering, stabilization tests and quality control to determine a series of possible indicators of change can serve as a scientific theory and early treatment method, as early clinical diagnosis, and lay the foundation for future experiments.

Key words: Immunoglobulin M,Immunoturbidimetry,Detection kit,Buffer

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 引言 1

1.1实验基本介绍 1

1.1.1实验设计背景 1

1.1.2免疫球蛋白M的意义 1

1.1.3免疫比浊技术 1

1.1.4免疫球蛋白M可检测疾病 2

第二章 实验仪器与材料试剂 4

2.1实验仪器仪器与材料试剂 4

2.1.1主要仪器 4

2.1.2主要原料 4

第三章 实验试剂的配置、调优、记录 5

3.1配制方法 5

3.1.1R1、R2缓冲液的配制 5

3.1.2抗血清比例参数的确定 5

3.2仪器参数 6

3.2实验条件 6

3.3校准品 6

3.4检验原理 6

第四章 不同厂家试剂比例确定 7

4.1实验方法和数据记录 7

4.1.1钹乐诗抗血清的实验操作内容及数据分析 7

4.1.2阿匹斯抗血清的实验操作内容及数据分析 9

4.1.3菲鹏抗血清的实验操作内容及数据分析 11

第五章 不同厂家抗血清性能指标筛选 2

5.1钹乐诗抗血清试剂全性能测试 2

5.1.1钹乐诗抗血清定标 2

5.1.2钹乐诗抗血清重复性CV 2

5.1.3钹乐诗抗血清准确性 2

5.1.4钹乐诗抗血清临床比对 2

5.2阿匹斯抗血清试剂全性能测试 2

5.2.1阿匹斯抗血清定标 2

5.2.2阿匹斯抗血清重复性CV 2

5.2.3阿匹斯抗血清准确性 2

5.2.4阿匹斯抗血清临床比对 3

5.3菲鹏抗血清试剂全性能测试 3

5.3.1菲鹏抗血清定标 3

5.3.2菲鹏抗血清重复性CV 2

5.3.3菲鹏抗血清准确性 2

5.3.4菲鹏抗血清临床比对 2

5.4检验结果的解释及检验方法的局限性 2

5.4.1检验结果的解释 2

5.4.2检验方法的局限性 2

第六章 结论 3

致谢 4

参考文献 5

第一章 引言

1.1实验基本介绍

1.1.1实验设计背景

人民生活越来越美好，但随之而来的疾病也接踵而至。先天缺陷导致的，病毒急性传染的，其他疾病导致的一系列疾病影响着我们的正常生活，损害人们的生命健康^[1]。所以我们需要提前的去发现，去检测，去预防疾病的出现。以及疾病出现后的治疗等一系列问题，从而降低疾病的发生^[2]。

1.1.2免疫球蛋白M的意义

免疫球蛋白M (IgM)是最大的分子量的免疫球蛋白，主要由脾脏和淋巴结的等离子细胞分泌合成。它可以分为IgM1和IgM2亚型。它主要以五聚体的形式在血清中传播，占Ig总血清的5% -10%。IgM具有强大的细菌活性、免疫调节和凝集功能，并参与了一些自身免疫疾病的病理过程和增强敏感性。血清中最常用的IgM检测方法是单侧免疫扩散和免疫涡轮增压，但后者逐渐取代了前者。免疫球蛋白M(或简称IgM)是B细胞分泌的主要抗体，是人类血液中发现的最大的抗体^[3]。它也是第一个对抗原接触做出反应的抗原。脾脏是IgM最大的生产商。B细胞表面与单细胞的形状相连，分泌形态由5种Y型单细胞组成，形状为高密度五角星。由于它的高分子量，它在抗原凝集方面非常有效。在B细胞免疫系统的早期阶段，IgG是不完整的，在这个阶段，IgM主要扮演着清除病原体的角色。因此，IgM经常被用作感染的指标^[4]。

免疫球蛋白M 检测试剂盒的预期用途及临床意义：

预期用途：该试剂盒用于定量检测人血清中免疫球蛋白M（IgM）的含量。血清免疫球蛋白M水平的增高可见于巨球蛋白血症、病毒性肝炎急性期、结缔组织疾病、传染性单核细胞增多症等疾病^[5]；降低常见于免疫缺陷症、慢性淋巴细胞性白血病、尿毒症患者等^[6]。

临床意义：临床上多采用免疫比浊法、胶乳增强免疫比浊法。

1.1.3免疫比浊技术

免疫比浊技术是在免疫沉淀反应（抗原与相应抗体在液相反应时，如抗体结合位点略多于或等于抗原表位，二者交联良好，生成大的不可溶性免疫复合物的沉淀）检测法的基础上建立起来的^[7]。免疫学检验中最早应用的免疫沉淀反应是1984年Ouchterlony建立的琼脂双向扩散法（观察抗原孔与抗体孔之间是否出现沉淀线）。1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单向（辐射状）免疫扩散技术。并广泛用于血清蛋白质（IgG、IgA、IgM、补体C3、补体C4等）的定量检测。为了缩短检测时间，Laurell等于1966年建立了电免疫扩散法(俗称火箭免疫电泳，观察沉淀峰高度)，使报告结果的时间由单向免疫扩散法的≥24h缩短至4～5h。以上这些方法直到20世纪80年代末仍在临床广泛应用，但灵敏度(每1ml可检出最小量为“毫克”水平至“微克”水平)和精密度(变异系数≥10％)均较差，且操作繁琐、费时，不能自动化^[8]。

免疫比浊技术原理：

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