文 献 综 述

摘要：综述了固相多肽合成中聚合物载体和连接分子、保护基选择、接肽反应方法、去保护的过程及固相合成所存在的问题。多肽的合成不仅具有重要的理论意义，而且具有重要的应用价值。特别是固相多肽合成方法的创立和发展。

关键词：多肽固相合成；氨基酸的保护；接肽。

多肽是α- 氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。多肽一般指由低于五十个氨基酸组成的化合物，它们的分子量低于10000Da（Dalton道尔顿），能透过半透膜，不被三氯乙酸及硫酸铵所沉淀。高于五十个氨基酸以上的化合物通常称为蛋白质。每一种多肽都具有独特的组成结构，不同多肽的组成结构决定了其功能。多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质，其在生物体内的含量很低，但却具有显著的生理活性。

人们获得多肽的来源^[1]有：① 存在于生物体中的各类天然活性肽；② 消化过程中产生或体外水解蛋白质产生；③ 通过化学方法（液相或固定相）、酶法、重组 DNA 技术合成。目前酶法合成只局限于短肽的合成，而重组 DNA 技术则能合成大分子肽，但需要一个长期的研究与开发阶段。固相合成法则是用来合成中等链长多肽的主要方法。固相合成法在 20 世纪 60 年代才出现，Merrifield ^[2] 创立并发展了固相多肽合成的方法，具有里程碑的意义，对化学、生化、医药、免疫及分子微生物等领域都有巨大的推动作用。

1、多肽固相合成概述

化学多肽合成是按照设计的氨基酸顺序，通过定向形成酰胺键方法得到目标分子。从理论上讲这并不复杂，但实施起来却非常困难。简单的羧酸与胺之间形成酰胺键，一般是先将羧基转变成一个活泼的羧基衍生物（如酰氯或酸酐）再与胺作用，或者在反应体系中加入缩合剂。氨基酸之间形成酰胺键情况则复杂得多，每一个氨基酸既含有氨基，同时又含有羧基。如果将一种氨基酸的羧基活化，则其可以和同一种或另一种氨基酸分子的氨基反应；如果将几种氨基酸混合在一起，加入缩合剂，则会得到由具有多种不同氨基酸顺序的多肽组成的混合物。随着肽链的增长，副产物更多，合成将更困难。

Merrifield 创建并发展了多肽的固相合成方法之后，多肽研究领域发生了划时代的变化。固相方法以快速简便的操作和高产率显示了无可比拟的优越性^[3]，与传统的液相合成法相比，固相载体有利于合成中不断增长的肽链固定、环化、去保护和纯化，且易实现自动化。然而，由于设备和试剂的昂贵严重限制了固定相合成法在规模化生产上应用。目前主要在合成含有 10~100 个残基的多肽或为筛选而快速建立多肽库时应用。

固相合成的主要设计思想是^[4]：先将所要合成肽链的羟末端氨基酸的羟基以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合在固相载体上，氨基酸作为氨基组分经过脱去氨基保护基，并同过量的活化羟基组分反应接长肽链。重复缩合－洗涤－去保护－中和和洗涤－下一轮缩合的操作，最终达到所要合成的肽链长度；最后将肽链从树脂上裂解下来，经过纯化等处理，即得所要的多肽。

其基本原理如下图所示：

图1 多肽固相合成原理