1. 研究目的与意义（文献综述）

1.1芦苇，多年水生或湿生的高大禾草，生长在灌溉沟渠旁、河堤沼泽地等，世界各地均有生长，芦叶、芦花、芦茎、芦根、芦笋均可入药。芦苇是湿地环境中生长的主要植物之一。多生长于池沼、河岸、溪边浅水地区，常形成苇塘。芦苇为全球广泛分布的多型种。除森林生境不生长外，各种有水源的空旷地带，常以其迅速扩展的繁殖能力，形成连片的芦苇群落。分布于中国各地，生于江河湖泽、池塘沟渠沿岸和低湿地。由于芦苇的叶、叶鞘、茎、根状茎和不定根都具有通气组织，所以它在净化污水中起到重要的作用。

芦苇具有很强的耐污能力，在生化好氧量高达每升一千毫克的污水中仍能正常生长。对城市生活污水和造纸、制糖等企业排放的有机废水有较强的适应性。德国已将芦苇塘作为一万人口的城镇生活污水处理场并获得成功，前苏联用苇塘（芦苇占70%，还有香蒲、黑三凌、菖蒲等植物）处理生物化学和维生素生产厂及制糖厂废水，六天后，生化废氧量减少99.5%，化学耗氧量下降92.8%，磷酸盐下降99.8%，部无机盐下降32.7%。我国还报道过苇塘水中氯化物可减少90%，有机氯可减少60%，总硬度减少33%。苇根还能杀灭大肠杆菌，去除某些金属离子。

芦苇高超的净污能力是与其植株特点、光合能力、输氧本领分不开的。芦苇是一种多年生的水生维管束植物，其茎叶挺出水面，又称挺水植物，根、地下茎生于泥土及水中，相互交织，水下部分具有水生植物的特点，而水上部分又具有陆生植物的特性。芦苇具有很强的蒸腾作用。盛夏，每平方米稠密的芦苇每天散发到大气中的水分可达7.5升，每年能将一至二米深的水蒸腾到空中。芦苇光合能力强，太阳辐射能的利用率可高达3.5%，在绿色植物中是较高的，它能在水中吸收大量的氮、磷等营养物质，每公顷芦苇去氮量达680-1650公斤，去磷量达48-154公斤。芦苇还能将氧从叶部经茎、地下茎输送到根端，每平方米芦苇每天向根部土壤及水中供氧量可达5-47克，从而为根部附近的微生物及细菌繁衍创造了良好条件，使之在根部附近密集孳生，比周围高出几个数量级，而这些微生物和细菌是分解有机物的好帮手，它们分解的产物正好被自身和芦苇所利用，起到了净化污水的作用。

2. 研究的基本内容与方案

实验前准备，从植物中分离出dse菌种，再从dse菌种种分离出所需实验菌种（x-03）。把试验用菌种用试管培养基（马铃薯-蔗糖培养基）培养，得到x-03纯菌种菌落，放入冰箱冷藏室备用。

实验开始时从试管培养基中采用接种环划线法接种纯菌到固体培养基上（操作全程在sw-cj-id型单人净化工作台上进行），接种后的培养皿放入实验室恒温培养箱（智能光照培养箱ghp-300型）25摄氏度培养。同时武汉汉口江滩及武汉南湖采回芦苇杆（带节点的茎），用清水在浅盆里泡发，等到芦苇杆节点处长出嫩芽生出根，当发出的芽长到5-10厘米长，且发出的根长到2-5厘米长时，即可把芦苇移植到盆栽。在把芦苇幼苗移植到盆栽同时，用打孔器（5mm或10mm）在前一步培养好的培养基上打孔，打孔后x-03菌落群被分成一个个均匀的小饼，每个盆栽中放入个数相同的若干个真菌小饼（沿四周均匀放置），即完成x-03真菌对芦苇的侵染。盆栽采用购买的聚丙烯塑料杯（容量1l），杯中装有均质细沙。细沙取自武汉室内的施工工地，在实验室用gzx-9030mbe电热鼓风干燥箱在温度180摄氏度下烘干3个小时，然后用孔径1.4mm的筛子筛滤后得到用作盆栽基质的均质细沙。实验设三个实验组（水淹接种dse，正常接种dse，干旱接种dse），三个对照组（水淹不接种dse，正常不接种 dse,干旱不接种dse），每组若干个盆栽（不少于5个），放入ghp-300型智能关照培养箱培养30天。培养箱温度设为恒温25摄氏度，每天光照8小时。

培养30天后比较每个实验组与对照组芦苇的生长状况和营养状况。主要的指标有生物量，苗高，地径，根长，dse侵染率，根系活力，全n，全p，含水量。渗透调节物质：可溶性糖，可溶性蛋白，脯氨酸。抗氧化酶活：sod, cat，pod, mda 含量。光合特征：叶绿素含量，净光合速率，蒸腾速率，气孔导度，胞间二氧化碳浓度。生物量测定可采取燃烧称重法测定，苗高，地径，根长可采用游标卡尺测量。根据phillips和hayman方法对dse进行染色，然后按birmann和linderman的方法测定dse侵染率。随机选取30条1cm长根段用100g/l koh处理，酸性品红染色后，脱色液脱色，在光学显微镜下观察dse定殖结构，并统计dse侵染率和侵染强度。侵染率=受侵染根段数/总镜检根段数×100%。植物的根系能氧化吸附在根表面α-萘胺，生成红色的α-羟基-1-萘胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色。根对α-萘胺氧化能力与其呼吸强度有密切关系，日本人相见、松中等人认为α-萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的作用，该酶的活力越强，对α-萘胺的氧化能力也越强，染色也越深。所以，可以根据染色的深浅定性的判断根的活力。总氮采用紫外分光光度法测定硝态氮。全磷的测定采用h#8322;so#8324;-h#8322;o#8322;消煮钒钼黄比色法测定。含水量的测定，先称植物的下种m1，放入洗净的铝盒再放在105摄氏度恒温烘箱内烘烤，冷却，称重，重复操作直到恒重为止，得出植物干重m2，含水量m=m1-m2。可溶性糖的测定可用蒽酮试剂法测定。检测sod采用分光光度法。可溶性蛋白的测定采用劳里法。

3. 研究计划与安排

第一周（2.26-3.4）、查阅深色有隔内生真菌，芦苇特点及净污能力，dse与植物共生关系，国内类似实验等背景资料。

第二周（3.5-3.11）、毕业实习

第三周（3.12-3.18）、获得dse菌株，从中筛选出x-03菌种培养活化获得纯菌种母菌；从汉口江滩芦苇荡采回芦苇杆，在实验室用清水培养，使其生根发芽得到芦苇幼苗；购买盆栽用的塑料杯，准备好沙子并灭菌待用等准备工作

4. 参考文献（12篇以上）

[1] 班宜辉.不同程度铅锌污染区丛枝菌根真菌和深色有隔内生真菌侵染特征[d].西安：西北农林科技大学，2013 .

[2] 班宜辉.不同程度铅锌污染区丛枝菌根真菌和深色有隔内生真菌侵染特征[j].西北植物学报,2012,32(11):2336-2343.

[3] 马雷猛,王鹏腾,王曙光.淹水时长对3种丛枝菌根am真菌侵染2种湿地植物的影响[j]环境科学,2014,35(1):263-270.