文 献 综 述

1.1 研究背景

金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属成员,在自然界中无处不在,从空气、水、灰尘及人和动物的排 泄物中都可以找到^[1]。金黄色葡萄球菌污染食品引发的食物中毒也屡有发生。金葡菌能分泌20多种毒性蛋白质，其产生的毒素主要有肠毒素杀白细胞毒素表皮剥脱毒素和和中毒休克综合征毒素-1，侵袭性酶类主要有血浆凝固酶脱氧核糖核酸酶、脂肪酶、磷酸酶、透明质酸酶、胶原酶和溶纤维蛋白酶等。金黄色葡萄球菌以惊人的速度在世界范围内蔓延，成为医院内最常见的病原菌，与乙型肝炎艾滋病同为当今世界三大感染顽疾。近年来，金黄色葡萄球菌在食品致病菌的检出率也非常高^[2]，另外金黄色葡萄球菌极易获得耐药基因，对抗生素产生耐药^[3]，大多数菌株均有不同程度的耐药性^[4]。

金葡菌的鉴定通常采用玻片凝固酶试验( 凝集因子) 和试管凝固酶试验( 游离凝固酶) ，玻片凝固酶试验阳性的菌落需要用试管凝固酶试验来进行

确认; 也可采用DNase培养基平板，但阳性结果同样需要进一步确认 但是这种金标准的常规方法存在很多不足，如耗时过长( 检测至种属水平需高达6d) 假阴性以及低敏感度和检出限( 对固体和液体食物样品检出限分别为100和10cfu/g)。

摆在食品安全工作者面前的问题是金黄色葡萄球菌的检测，怎样快速地完成检测，这是食品安全检测方法中比较薄弱的地方，也是食品安全工作者不停努力的方向。前人已经在食品微生物的分析方面做出了大量的研究，但传统的实验室分离培养方法不能及时反映出某一生态环境中的细菌构成和变化规律。因此需要快速，灵敏，准确的检测技术来检测细菌，及时的反映细菌的构成和变化规律，分子生物学检测技术恰恰能做到这两点。对于金黄色葡萄球菌的检测，反向胶乳凝结法、酶联免疫吸附法、聚合酶链式反应(PCR)技术,以及最新发展起来的VID AS系统法、傅里叶变换红外光谱法、基质辅助激光解吸-电离飞行时间质 谱法等金黄色葡萄球菌检测方法。其中荧光定量PCR法1995年出现的以标记特异性荧光探针为特点的荧光定量PCR技术，实行完全闭管式操作，不仅能大大减少扩增产物的污染机会，提高检测的特异性，且可通过计算机自动分析对扩增产物进行精确定量提高检测的灵敏度，完全克服了普通PCR的缺点，且该方法操作简便迅速，适用于大样本量的筛查 ，因此PCR技术在分子检测技术中应用的最为广泛^[5]。

PCR检测技术的第一步就是模板DNA的制备，即样品中DNA的提取，这直接影响着PCR反应的结果。长期以来，样品中DNA的提取和纯化一直是耗时、繁琐的过程，严重减慢了检测速度^[6]。

因此，研究DNA的提取方法对提高PCR检测技术的效率起着至关重要的作用。

1.2 研究现状及分析

金黄色葡萄球菌的检测方法有很多，其中荧光酶标免疫分析法具有灵敏度高、特异性强、操作简单方便 等优点,而且对被检细菌需要纯培养, 只要存在于增菌培养基中即可检出^[7]。因为VIDAS系统检测系统是酶联免疫分析法, 在极少情况 下会产生非特异性结合而造成假阳性的结果。傅里叶变换红外光谱检测具有分析速度快、效率高, 样品不需进行前处理, 不会污染食品的优点, 但是测试灵敏度相对 较低, 且是一种间接分析技术, 其所依赖的模型, 必须事先用标准方法或参考方法, 对一定峰位内的样品测定出组成或性质数据^[8]。现阶段对金黄色葡萄球菌的检测，以往主要依赖常规微生物学方法, 一般需要5~7 天,既费时又费力,因此快速检验方法已经成为保证食品安全的迫切需求。