糖基转移酶ZS4在大肠杆菌中的异源高效表达文献综述
2020-04-13 15:27:07
1.糖基转移酶的重要性
糖基化是植物代谢过程中的一个重要的修饰反应.目标修饰物一般为二级代谢产物[1]。一般情况下,糖基化反应是众多植物二级代谢产物(诸如黄酮类、氰醇类、甾体生物碱类和皂苷类)生物合成过程中的最后一步[2] 。目前,超过六千种不同的葡萄糖衍生物已被鉴定出来[3]。糖基化主要发生在氧原子位(COOH-和 OH-),硫原子位(S-),氮原子位(N-)和碳原子位(C-),核苷酸上的活性糖基作为供体[4]。目前,引入糖基主要依靠化学合成和酶促反应两种途径实现。
2.目前大肠杆菌中异源蛋白高效表达的常见方法
一种高效的原核表达载体需要包括一个强大并且可以严紧调节的启动子;一位于翻译起始密码子5#8217;端大约9bp的SD序列;位于目的基因3#8217;末端的一个高效转录终止子。除此之外,载体还需要一个复制起点,筛选标记和利于对启动活性进行严紧调节的基因。这种调节元件可以插入载体自身,也可以插入宿主的染色体。其他的元件包括转录和翻译增强子等。这些元件的作用往往具有基因特异性,因此要根据不同的情况加以取舍。尽管目前在E.coli中表达外源基因方面已经有许多重大进展,但仍有许多问题亟待解决。
归纳起来主要有以下几点:
1.借助于细胞的分子伴侣机制来提高正确折叠的蛋白质的产量。或许可以通过共表达多种分子伴侣编码基因和通过激细胞内众多不同的分子伴侣的方法来实现。
2.在E.coli中表达真核膜蛋白和多亚基蛋白质复合物的难题上有待解决。
3.蛋白质分泌到培养基中的真正和有效机制需要明了。目前已经有多种体系能够使重组蛋白质分泌到培养基中。其中有些是利用信号肽、融合伴侣和具有穿透能力的因子,这种因子能够引起外膜的破坏和有限的渗漏。而另外的策略是利用已经存在的分泌通道,来保证更高特异性的分泌。
4.赋予原核细胞诸如真核细胞那样进行翻译后修饰的能力。例如糖基化、磷酸化、乙酰化和酰氨化等[5]。
3.常见的诱导剂种类、温度、时间及相关案例