1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文 献 综 述

摘要：

莱鲍迪甙a(rebaudioside a，ra甙)是一种无毒、安全、低热能、高甜度的天然甜昧剂，口味纯正，没有后苦味，。目前国内外主要运用利用酶的催化作用，在st甙和ra甙上增加特定基团如葡萄糖基（glc）或果糖基（fru）单元，以使口味更接近与蔗糖，酶改性甜菊糖甜度为蔗糖的100倍左右。根据代谢流理论分析，要想提高ra甙产量，得提高udp-糖基转移酶的酶活。为了有效表达外源基因（ugts),可以通过额外的添加酵母组成型的强启动子如：ppgk、padhi、pgpd到酵母pesc 载体上来实现。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

研究目的：优化改造启动子，并将启动子酶切连接到含有目的基因的质粒上，转入到酿酒酵母中进行培养表达，实现糖基转移酶在酿酒酵母内的高效表达。

研究手段：

在一定条件下，mrna的生成速率与启动子的强弱有关，而转录又在很大程度上影响基因的表达。

将目的基因连接到酿酒酵母的pesc质粒上，使用某种特异性酶对该质粒进行酶切，对酶切位点处的基因进行略微改造，并通过某种酶将含有启动子的dna片段进行重组，变成环状质粒，再将质粒转移到酿酒酵母内。然后进行目的基因的表达。通过培养基培养，全细胞催化等来观察是否能有效地提高ugt的酶活。进而才可以知道启动子是否对目的基因的表达有效，并且是否高效表达。