1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

国内外研究现状、发展动态 纤维素分子通过氢键及范德华力相互作用连接形成基元纤维（protofibrils），基元纤维组装成更大的微原纤维（microfibrils），微原纤维再依次组装形成纤维素[1-2]。

半纤维素填充在微原纤维中，木质素则主要镶嵌在微原纤维的周围形成坚固的网络[3-4]。

另外，木质纤维素具有多样性，其大小、形状及结晶度在不同植物的不同组织中都是不同的。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

研究方法、实施方案、技术路线及可行性分析 1研究方法 （1）使用eg5c-1序列在quikchange primer design上设计eg5c-1第238位苯丙氨酸的饱和突变引物； （2）使用e.coil bl21和pet 28作为载体对突变菌株进行转化和表达； （3）发酵表达得到粗酶液，使用histrap ff column进行亲和层析纯化，收集样品时使用pnpc检测是否有酶活； （4）使用cmc、avicel、滤纸、pnpc、rac作为底物对纯化酶液进行酶活检测，筛选出高外切酶活性的突变菌株，然后对筛选出的菌株使用avicel测定其与底物的结合能力； 2实施方案 （1）突变菌株引物设计：将eg5c-1序列输入quikchange primer design程序中，以第238位苯丙氨酸（f）为突变点设计饱和突变引物，注意大肠杆菌密码子偏好性。

将设计好的引物按要求填写好发往金维智公司进行合成。

（2）突变菌株的转化与保存：以eg5c-1为原始菌株，利用质粒提取试剂盒提取质粒作为pcr模板，使用primer star高保真酶和突变引物进行全质粒扩增，然后以e.coil bl21作为感受态进行热击转化，涂布于卡那平板。