人表皮生长因子在大肠杆菌中的高效可溶性表达与纯化开题报告
2020-05-02 18:30:25
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文 献 综 述 1. 人表皮生长因子概述 1.1 人表皮生长因子的结构及功能 人表皮生长因子(human epidermal growth factor, hegf)是一种存在于人体内的具有广泛生物活性的多肽,分子量约为6kda。
它由53个氨基酸组成,并且有三个二硫键,使得hegf具有较高的稳定性。
在血液、唾液、乳汁、胃液和尿液中均发现了hegf 的存在,其中在胃液和肠液中的含量最高。
2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
一、本课题研究或解决的问题 1. 了解人表皮生长因子的结构和功能特性 2. 了解重组大肠杆菌可溶性表达系统 3. 掌握现阶段常用的信号肽的种类和机理 4. 掌握构建高效表达的信号肽OmpA融合hEGF的表达载体的方法 5. 了解影响外源蛋白表达的因素并学会对其加以优化 6. 掌握蛋白纯化的方法 二、拟采用的研究手段 1. 熟练运用关键数据库查阅相关文献,解决实验问题 2. 通过一些期刊杂志了解到有关重组大肠杆菌中外源蛋白可溶性表达分泌的一些常用的方法和最新的进展 3. 构建改造后信号肽OmpA融合hEGF的大肠杆菌表达载体 4. 优化表达条件,得到最佳表达条件。
5. 使用凝胶色谱柱进行目的蛋白的纯化,并用MTT法进行蛋白活性鉴定 6. 根据老师的意见及时更正实验方法,完善实验数据,并修改完善论文