发酵液中四种核苷酸的分离研究开题报告
2020-05-03 22:06:25
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
一、四种核苷酸的概述 一类由嘌呤碱或嘧啶碱基、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。
又称核甙酸。
五碳糖与有机碱合成核苷,核苷与磷酸合成核苷酸,4种核苷酸组成核酸。
2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
核酸水解液的制备 配制质量浓度为1%的rna溶液,用1mol/l的naoh调 ph值至5.2,以35u/g rna的酶加量加入5#8217;-磷酸二酯酶, 67℃恒温水浴24h,既得核酸的水解液。
树脂的预处理 层析树脂的处理:(1)首先使用约为树脂体积的2~3倍 的饱和食盐水浸泡树脂18h~20h后以每小时1.5倍床层体积 的流量流过树脂,用清水漂洗净至排出水不带黄色;(2)再 用为树脂体积的2~3倍1mol/l的hcl溶液浸泡树脂2h~4h 后以每小时1.5倍床层体积的流量缓慢流过树脂,放尽酸液 后,用蒸馏水冲洗树脂直至排出水接近中性(ph值约5左 右);(3)再用约为树脂体积的2-3倍的1mol/l的naoh溶液 浸泡树脂2h~4h后以每小时1.5倍床层体积的流量流过树 脂,放尽碱液后,用蒸馏水冲洗树脂直至排出水接近中性 为止(ph值约为 9);(4)最后用为树脂体积2~3倍的1mol/l 的盐酸溶液浸泡树脂4h~8h后以每小时1.5倍床体积的流 量流过树脂,放尽酸液,用去离子水冲洗至流出水接近中 性(ph4~5)待用. 离子交换层析法操作步骤 (1)层析树脂的平衡:经过预处理后的树脂用与料液 相同ph值的盐酸溶液平衡数小时,直到流出液与平衡液 ph值一致时为止。
(2)加样:将核酸水解液沿层析柱壁缓缓加入至树脂 表面(避免将树脂表面冲起),打开下端出口使水解液缓慢 流入树脂中,用少量蒸馏水冲洗管壁,然后用洗脱液洗脱, 核酸蛋白检测仪在线监测分离情况,自动收集器收集 洗脱液。