文 献 综 述

一、前言

抗体是机体防御系统的重要分子，用于识别和清除外来入侵物。为了尽可能地与各种外来物发生相互作用，免疫系统需要产生无数种特异性的抗体分子。不同抗体的全套遗传信息被储存在淋巴系统的B细胞中。1975年杂交瘤技术问世，人们能够制备具有很好特异性的单克隆抗体，但这些抗体在用于人类疾病治疗时。由于单抗的异源性，会产生人抗鼠抗体反应（HAMA），同时由于抗体分子大，较难穿透血管屏障达到靶部位，而且抗体本身的效应功能有限，往往不能达到预期的杀伤靶细胞的目的。

在过去的十多年中，分子生物学的进展大大促进了抗体片段的基因操作：重组、鉴定、连接。重组抗体的基因操作不仅加深了人们对免疫球蛋白结构和功能的理解，而且通过基因融合、基因突变、重组基因表达发展了大量可用于研究、诊断和治疗的工程抗体特别是加速了人源化抗体和人源抗体的开发，同时通过基因操作可以获得常规技术不能得到的抗体的形式，使之更适合于治疗和体内诊断。目前正在进行临床试验的抗体药物有几百种，因此重组抗体作为药物有很广阔的前景[1]。

二、Fab抗体

2.1 Fab抗体的简介及发展现状

Fab抗体片段由完整的轻链和重链的VH CH1构成，其大小约为完整抗体的1/3,约55KD。Fab片段具有抗体活性，因为其不含有Fc段、分子量小、结合力高、抗原性低，故在肿瘤治疗上有其优越性。基因工程抗体中,Fab类(Fabs)抗体有许多优势,如相对分子质量小、组织分布特异性强和免疫原性低等,使Fab类抗体成为近几十年来的研究热点。除了应用较广泛的体外酶消化法外,多种表达系统(如大肠杆菌和昆虫等)皆用于Fab类抗体的获得,其中大肠杆菌表达的系统研究最为彻底,且已经应用于制备Fab类临床药物。目前已经有赛妥珠单抗等6种Fab类抗体药物通过了美国FDA申请并上市,并有多种Fab类药物正处于临床试验阶段[2]。

2.2 Fab片段的扩增及酶切

扩增人或鼠Fab抗体基因的引物根据免疫球蛋白基因不同家族的可变去基因序列设计而成[3]。小鼠杂交瘤细胞提取的总 RNA ,经碱变性琼脂糖凝胶电泳,可见RNA完整。将其逆转录合成单链 cDNA 为模板,PCR 扩增Fab抗体Fd段和轻链基因。可扩增出约650 bp产物条带,得到小鼠抗体重链Fd基因及轻链基因片段组合。将FD及轻链基因通过linker拼接形成Fab分子[4]。根据设计引物[5][6]扩增片段所带入的酶切位点[7]对片段进行酶切处理。

三、表达载体