摘 要

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原文内容

浦江学院 2016 届毕业设计（论文）

题目：HRV14-CA054的基因合成及其连接、转化和筛选

专业： 生物工程

班级： 生工1203班

姓名： 王艳

指导老师： 周精卫

起讫日期： 2016年3月~2016年6月

2016年5月

HRV14-CA054的基因合成及其连接、转化和筛选

摘要

基因工程技术革命是工业革命、信息革命之后又一次对人类社会产生深远影响的革命。目前，人工合成基因的方法已经十分普遍。

本文主要从PCR技术、连接转化和阳性克隆筛选技术等方面介绍了目的基因（HRV14-CA054）人工合成的全过程。这是基因工程在生物制药行业应用的一个重要方面，并且主要探明了目的基因（HRV14-CA054）的合成、重组体的构建及转化至感受态细胞、阳性单克隆的筛选等过程，并以此为基础探索出一条基因合成的便捷方法。通过基因的全合成，实现基因的分子级改造和人工组建，正逐渐发展为一种实验室常规手段。

目前获得目的基因的途径有三种。分别是反向转录法、从细胞基因组直接分离法和人工合成法。但是使用这些方法的前提就是已知所研究的目的基因的序列。而本文探索的是人工合成基因的方法。在已知所研究的目的基因序列的条件下，利用软件设计引物。引物由引物部门合成。

关键词：基因合成连接转化阳性单克隆筛选

Gene synthesis of HRV14-CA054 and its connection, transformation and selection

Summary: Genetic engineering technology revolution is the revolution after the industrial revolution and the information revolution.

And it has a far-reaching impact on human society. At present, the method of artificial synthesis of genes has been very common.

This paper mainly introduces the whole process of synthesis of target gene (HRV14-CA054) from the PCR technology, connection and transformation and the positive clone screening technology. This is an important aspect of the application of bio pharmaceutical industry of genetic engineering .And it probes the gene synthesis of (HRV14-CA054) ,construction of combination body and being transformed into competent cells, the positive clone screening process.This is based on exploring out a convenient method of gene synthesis.Through the synthesis of the gene, gene molecular modification and artificial construction, is gradually developed into a routine laboratory methods.

There are three ways to synthesize the target gene.The methods are reverse transcription, cell genome from direct separation method and artificial chemical synthesis. But using these methods is based on the known research institute. This paper explores the method of artificial synthetic gene. Under the known sequence of the target gene, using the software primer to design. Primers are synthesized by primer synthesis.

Key words:Gene synthesis；Connection；Transformation；Monoclonal positive screening

目录

摘要 ..........................................................................................................................................I

ABSTRACT ............................................................................................................................II

第一章文献综述 .............................................................................................................. 1

1.1 基因合成 .................................................................................................................... 1

1.2 HRV14-CA054..................................................................................................................2

1.2.1 基因序列...........................................................................................................2

1.2.2 概述................................................................................................................ ...2

4.1实验仪器和试剂.........................................................................................................12

4.2实验方法及步骤..........................................................................................................12 4.3实验结果及讨论.........................................................................................................13

第五章阳性克隆的筛选................................................................................................15

5.1实验仪器和试剂.........................................................................................................15

5.2实验方法及步骤.........................................................................................................15 5.3阳性单克隆筛选结果电泳检测..............................................................................17

第六章 PCR突变.........................................................................................................18

6.1实验仪器和试剂........................................................................................................18

6.2实验方法及步骤................................................. .......... ...........................................18

6.3实验结果及讨论........................................................................................................19

1. 葡糖脑苷脂酶基因与闽南地区汉族人群帕金森病的相关性研究 8.2%（218）

王琛(导师：马琪林) - 《福建医科大学硕士论文》- 2013-05-01 是否引证：否

1. 高中生物选修3《基因工程》专题教学中的问题及对策研究 7.8%（206）

于江欢(导师：胡建) - 《东北师范大学硕士论文》- 2013-05-01 是否引证：否

1. PCR技术简介 7.1%（189）

何燕,旦巴,卓嘎,孟霞 - 《西藏科技》- 2005-11-25 是否引证：是

1. 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR) 6.6%（176）

- 《现代生物医学进展》- 2007-12-30 是否引证：否

1. 树莓体外抑制人肝癌细胞系HepG2生长的实验性研究 6.6%（176）

张春鹏;刘明;赵金璐;林罗强; - 《实用肿瘤学杂志》- 2008-10-28 是否引证：否

1. 经典型Bartter综合征CLCNKB基因突变分析 6.6%（176）

刘茂静(导师：胡昭) - 《山东大学硕士论文》- 2011-03-16 是否引证：否 11 年龄相关性皮质性白内障波形蛋白基因外显子和启动子的研究 6.6%（176） 王慧(导师：徐国旭) - 《苏州大学硕士论文》- 2011-04-01 是否引证：否

1. 肿瘤细胞来源的诱导多能干细胞研究 6.6%（176）

秦鼎新(导师：李利民) - 《北京协和医学院博士论文》- 2010-06-01 是否引证：否

1. CFH、LOC387715/ARMS2、BF、ERCC6基因变异与南澳洲人口群年龄相关性黄斑变性的相关性研 6.6%（176）究

马灵军(导师：苏冠方) - 《吉林大学博士论文》- 2008-04-01 是否引证：否

1. 水族101-521005116-孙婷 6.6%（176）

孙婷 - 《大学生论文联合比对库》- 2014-06-04 是否引证：否

1. Marie Unna型遗传性稀毛症致病基因突变筛查及功能研究 6.4%（169）

蔡丽琼(导师：张学军;杨森) - 《安徽医科大学博士论文》- 2009-10-01 是否引证：否

1. 基于DSP的实时PCR仪温度控制系统的研制 6.2%（165）

何浩(导师：冯继宏) - 《北京工业大学硕士论文》- 2014-06-01 是否引证：否

1. 定量PCR仪荧光检测系统研究 4.0%（107）

姚英豪(导师：陈章位) - 《浙江大学硕士论文》- 2011-01-01 是否引证：否

1. 光纤型定量PCR仪荧光检测系统研究 4.0%（107）

钟珂珂(导师：陈章位) - 《浙江大学硕士论文》- 2013-01-01 是否引证：否

1. 10090903-郭文静-夏婷老师指导 4.0%（105）

郭文静 - 《大学生论文联合比对库》- 2013-04-19 是否引证：否 20 獭兔生长期肌生长抑素mRNA的组织表达差异分析 3.0%（80）

黄晶晶 - 《大学生论文联合比对库》- 2015-04-20 是否引证：否 21 金黄色葡萄球菌耐热核酸酶（NUC）基因的克隆与鉴定 2.4%（64） 叶罗婷 - 《大学生论文联合比对库》- 2015-05-04 是否引证：否 22 黄色葡萄球菌耐热核酸酶（NUC）基因的克隆与鉴定 2.4%（64） 叶罗婷 - 《大学生论文联合比对库》- 2015-05-08 是否引证：否

1. 1110500128 叶罗婷 金黄色葡萄球菌耐热核酸酶（NUC）基因的克隆与鉴定(曲道峰) 毕业论文 2.4%（64）

叶罗婷 - 《大学生论文联合比对库》- 2015-05-14 是否引证：否

1. 生物化学法协同处理城市污水试验研究 1.9%（49）

王海燕(导师：张可方) - 《广州大学硕士论文》- 2011-05-01 是否引证：否

1. 微流控芯片中微滴的形成及其在生物医学分析中应用 1.6%（43）

孙淑丽;刘宝红;杨芃原;吴会灵; - 《化学世界》- 2012-04-25 是否引证：否

1. 小麦拔节过程中基部茎节的基因差异表达 1.4%（37）

李永春;王潇;王创云;王美霞;李磊;尹钧; - 《植物生理学通讯》- 2008-10-15 是否引证：否 原文内容 第一章、文献综述

基因工程的基本内容：一是得到目的DNA片段。二是将目的基因与载体连接成重组DNA。三是把重组DNA转入受体细胞。四是把能表达的受体细胞挑选出来。本实验中，目的基因由人工合成。质粒是一种理想的载体。当把质粒切开，再给它安装上一段外来的DNA片段后，它依然能自我复制。有了限制酶、连接酶及运载体，就可以进行基因工程操作。在酶的作用下，将目的基因和质粒重新组合形成重组DNA。在质粒的“带领”下重组DNA进入受体细胞[12-13]。目的基因导入受体细胞后，是否