论文总字数：17880字

摘 要

近年来，免疫检查点抑制剂的开发代表了癌症治疗的重大突破。通过加强相关研究，基于单克隆抗体的靶向PD-1途径的药物在癌症治疗中显示出了广阔的前景。抑制免疫应答的负调节剂的免疫疗法的中心概念是恢复疲惫的细胞毒性T淋巴细胞的活性，再度攻击肿瘤细胞。PD-1是称为T细胞的免疫细胞上的检查点蛋白。本论文拟对抗PD-1单克隆抗体在食蟹猴体内的药代动力学特征及生物利用度进行研究，可为抗PD-1单克隆抗体后续的临床研究提供实验依据。

关键词：PD-1单抗；药代动力学；免疫疗法

Pharmacokinetics of PD-1 monoclonal antibody in cynomolgus monkeys

Abstract

In recent years, the development of immune checkpoint inhibitors has represented a major breakthrough in cancer treatment. By strengthening relevant research, drugs targeting the PD-1 pathway based on monoclonal antibodies have shown broad prospects in cancer treatment. The central concept of immunotherapy that suppresses the negative regulator of the immune response is to restore the activity of tired cytotoxic T lymphocytes and attack tumor cells again. PD-1 is a checkpoint protein on immune cells called T cells. This paper intends to study the pharmacokinetic characteristics and bioavailability of anti-PD-1 monoclonal antibodies in cynomolgus monkeys, which can provide experimental basis for the subsequent clinical research of anti-PD-1 monoclonal antibodies.

Keyword : PD-1 monoclonal antibody, Pharmacokinetics, Immunotherapy

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 引言 2

1.1研究背景 2

1.1.1免疫系统和肿瘤免疫疗法 2

1.1.2 PD-1单克隆抗体 2

1.2研究内容 3

第二章 实验材料 4

2.1实验材料 4

2.1.1供试品 4

2.2溶媒 4

2.3主要试剂及耗材 4

2.4实验仪器 6

2.5实验动物 6

第三章 实验方法 7

3.1分析方法验证 7

3.1.1实验准备 7

3.1.2样本准备 7

3.1.3 分析流程 8

3.1.4 分析验证指标 8

3.2实验设计 10

3.2.1动物分组 10

3.2.2给药 10

3.3药代样本 11

3.3.1样本采集 11

3.3.2分析方法 11

3.4受体占有率研究 11

3.4.1样本采集 11

3.4.2分析方法 11

3.5结果与讨论 12

第四章 数据与结果 13

4.1方法验证 13

第五章 展望 21

致谢 22

参考文献 23

缩略词列表

第一章 引言

1.1研究背景

1.1.1免疫系统和肿瘤免疫疗法

免疫系统的一项重要功能是能够区分人体内正常细胞和那些被视为“外来细胞”的细胞。这使免疫系统攻击外来细胞，而使正常细胞不起作用。为此，免疫系统使用“检查点”。这些阻碍癌细胞逃脱免疫系统追捕的药物称为检查点抑制剂^[7]。但是，用于治疗癌症的检查点抑制剂根本无法直接作用于肿瘤。他们只是阻止了已经开始但尚未充分发挥作用的免疫反应。所以，免疫疗法有助于免疫系统更好地抵抗癌症。对于人类来说，肿瘤的发生通常是由遗传和表观遗传畸变引起的，并产生了改变的抗原谱^[2]，可以通过适应性免疫反应选择性地识别。在宿主和肿瘤之间，动态相互作用的存在和肿瘤的免疫识别逃避能力直接决定了疾病的临床过程。癌症免疫疗法，也称为免疫肿瘤学，是一种抗肿瘤治疗策略，可以通过使用人工制剂（例如单克隆抗体，淋巴细胞和细胞因子）刺激免疫系统来提高抵抗癌症的有机天然能力。肿瘤免疫疗法和有效的免疫治疗策略（如癌症疫苗）相比，还远远没有成功。近年来，基于检查站封锁的癌症免疫疗法成为研究热点。免疫检查点由一组分子组成，它们是癌症免疫治疗的靶标，因为它们对肿瘤具有潜在的保护作用，从而摆脱了免疫系统的攻击。目前已批准将检查点阻塞（例如阻塞CTLA-4和PD-1 / PD-L1）用于多种类型的癌症^[9]。

1.1.2 PD-1单克隆抗体

程序性死亡受体1（programmed death-1，PD-1）是T细胞抑制受体和免疫检查点蛋白，在T细胞功能性紊乱时持续表达，可作为停止信号在肿瘤中限制T细胞的效应功能^[4]。PD-1单克隆抗体是PD-1的阻断剂，能结合PD-1并解除PD-1通路对T细胞的抑制作用。PD-L1与T细胞活化后在T细胞上表达的两个已知抑制受体（PD-1和B7.1）结合，在慢性刺激状态下，例如在慢性感染或癌症中，PD-L1会持续存在^[3]。用PD-1或B7.1连接PD-L1会抑制T细胞增殖，细胞因子产生和细胞溶解活性，从而导致T细胞功能失活或衰竭。因此，PD-1 / PD-L1和PD-1 / B7.1途径的中断代表了重新激发肿瘤特异性T细胞免疫力的一种有吸引力的策略^[10]。此外，以PD-1为靶点的免疫调节对抗肿瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及器官移植存活等也均有重要的意义。它们是免疫治疗的热点，也是医药巨头竞争的前沿阵地^[5]。

2018年，第三种PD-1单克隆抗体西米普利单克隆抗体在美国被批准用于治疗转移性皮肤鳞状细胞癌和局部晚期皮肤鳞状细胞癌^[11]。用针对PD-1和PD-L1的单克隆抗体进行的临床试验显示，患者的反应率令人印象深刻，尤其是对于黑色素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌和膀胱癌。但需要进一步研究以剖析可变反应率的机制，鉴定临床反应的生物标志物，开发小分子抑制剂以及探究与其他疗法结合。显然，PD-1单克隆抗体作为多种癌症的治疗策略在临床上得到了广泛应用。尽管几种PD-1单克隆抗体已获得FDA的批准，并且相关药代动力学研究得到了很好的研究，但新型PD-1 单克隆抗体仍缺乏药物代谢和组织分布数据^[6]。许多研究已经发现PD-1单克隆抗体具有多种药理作用和广泛的治疗活性，但对其药代动力学特征的系统评价仍然有限^[5]。因此，我们需要提供临床试验的基础，并评估了药代动力学参数和生物分布。尽管临床试验令人鼓舞，但许多患者对抗PD-1单克隆抗体疗法无反应或在初始反应后仍无结果，包括一些有治疗前PD-L1表达，免疫细胞浸润或中高肿瘤突变证据的患者。但抗PD-1药物与其他免疫疗法药物的组合可能提供克服这些对抗PD-1单一疗法反应障碍的机会。就目前的疗效来讲，PD-1治疗后黑色素瘤的客观缓解率（ORR）为30％至40％，复发或难治性霍奇金淋巴瘤的客观缓解率为87％^[12]。因此，PD-1治疗依旧不失为显著提高有效患者生存率的好方法。中国目前有许多公司处于PD-1的开发或临床阶段，他们通常使用啮齿动物模型来确定单克隆抗体药物的早期药代动力学参数。药代动力学试验和安全性研究均需在适当的物种中进行。因此，使用食蟹猴评估了PD-1的药代动力学参数。

1.2研究内容

PD-1为单克隆抗体药物，适应症主要为黑色素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌和膀胱癌等。本试验考察了PD-1注射液单次静脉输注给予食蟹猴的药代动力学特征及受体占有率，为临床试验提供参考数据。通过检测标准曲线、质控（精密度与准确度）、定量限、稀释线性、钩状效应、稳定性、选择性、特异性、平行性与血药浓度来进行评估。

第二章 实验材料

2.1实验材料

2.1.1供试品

名称：PD-1注射液

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