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摘 要

本文通过免疫比浊法研制载脂蛋白B检测试剂盒，通过实验，研究测试不同厂家的抗体和不同缓冲液的最佳配比，并在随后继续进行质量控制、稳定性测试以及稳定性测试等，最终确定试剂盒各项指标均能满足临床检测的要求。并且载脂蛋白B的研究也具有重大应用前景，如动脉粥样硬化及冠心病的检测。本次研究能够为临床早期诊断和治疗提供可靠的科学理论依据，这也为我们在未来取得进一步的进展优化实验奠定了基础。

关键词:载脂蛋白B；免疫比浊法；检测试剂盒；缓冲液

Development of Apolipoprotein B Detection Kit (Immunoturbidimetry)

Abstract

In this paper, we developed the apolipoprotein B detection kit by immunoturbidimetry. Through experiments, we studied and tested the best ratio of antibodies from different manufacturers and different buffers, and then continued to carry out quality control, stability test and stability test. Finally, we determined that all indicators of the kit could meet the requirements of clinical detection. And the research of apolipoprotein B also has great application prospects, such as the detection of atherosclerosis and coronary heart disease. This study can provide reliable scientific theoretical basis for clinical early diagnosis and treatment, which also lays the foundation for us to make further progress and optimize the experiment in the future.

Keywords: Apolipoprotein B, Immunoturbidimetry, Detection kit,Buffer

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 引言 1

1.1实验基本介绍 1

1.1.1实验设计背景 1

1.1.2载脂蛋白B的意义 1

1.1.3动脉粥样硬化 1

1.1.4免疫比浊法 1

第二章 实验仪器原料 3

2.1仪器与原料 3

2.1.1主要仪器 3

2.1.2主要原料 3

第三章 试剂配制方法记录 4

3.1配制方法 4

3.1.1缓冲液的配制 4

3.1.2试剂的配制 5

3.2实验条件 6

3.3校准品 6

3.4检验原理 6

第四章 实验方案测量记录 7

4.1实验方法和数据记录 7

4.1.1菲鹏抗体的实验操作内容及数据分析 7

4.1.2阿匹斯抗血清的实验操作内容及数据分析 9

4.1.3钹乐诗抗血清的实验操作内容及数据分析 10

第五章 不同厂家抗血清性能指标筛选 13

5.1菲鹏抗血清试剂全性能测试 13

5.1.1菲鹏抗血清定标 13

5.1.2菲鹏抗血清重复性CV 13

5.1.3菲鹏抗血清准确性 14

5.1.4菲鹏抗血清临床比对 14

5.2阿匹斯抗血清试剂全性能测试 14

5.2.1阿匹斯抗血清定标 14

5.2.2阿匹斯抗血清重复性CV% 15

5.2.3阿匹斯抗血清准确性 15

5.2.4阿匹斯抗血清临床比对 15

5.3钹乐诗抗血清试剂全性能测试 16

5.3.1钹乐诗抗血清定标 16

5.3.2钹乐诗抗血清重复性CV% 16

5.3.3钹乐诗抗血清准确性 17

5.3.4钹乐诗抗血清临床比对 17

5.4检验结果的解释及检验方法的局限性 17

5.4.1检验结果的解释 17

5.4.2检验方法的局限性与不足 17

第六章 结论 18

致谢 19

参考文献 20

第一章 引言

1.1实验基本介绍

1.1.1实验设计背景

现代社会，随着医疗技术的不断进步发展，人类寿命大为延长，但同时由此导致的人体器官机能老化及相关病症也越发成为大众的重点关注对象，其中，冠心病的发作和动脉粥样硬化也是困扰大众的一个难题。所以我们需要进行提前的预防，检测，争取做到早发现早治疗。^[1]

1.1.2载脂蛋白B的意义

载脂蛋白（Apo）是血浆脂蛋白的蛋白质部分，能将血脂转运到人体组织中进行代谢和利用。Apo的水平大多由编码调节脂蛋白合成、相互转化和分解代谢的蛋白质基因决定。^[2]多数研究表明，Apo基因突变、形状与Apo不同的对立基因多型不同的表现型会影响血脂的代谢和利用，以及循环器官疾病的发生和发展。可以分为A、B、C、D和E五个类别，其中ApoB在相对分子量、免疫和代谢有多态的特征。影响血液中脂质代谢，影响冠状动脉性心脏病的发生和进展的Apo的某些遗传变异对外界变得敏感。ApoB基因多态性与脂质代谢相关，异常的脂质代谢公认是动脉粥样硬化的重要因素，而雅典罗姆性动脉硬化症是导致冠状动脉性心脏病基础动脉硬化的重要因素。^[3]

1.1.3动脉粥样硬化

雅典罗姆性动脉硬化症是冠状动脉疾病和缺血性脑卒中的主要原因^[4]。研究证实，动脉硬化症是动脉壁的炎症性病变，但这仅是一般现象。确切的病因还不清楚。遗传的感受性和环境危险因素，如家族经历，高胆固醇血症，吸烟，高血压，糖尿病，肥胖等是雅典罗姆性动脉硬化症患者的心血管和脑血管活动的主要影响因素，也是动脉硬化的预防和治疗的焦点。^[5]

1.1.4免疫比浊法

免疫比浊技术是在免疫沉淀反应（抗原与相应抗体在液相反应时，如抗体结合位点略多于或等于抗原表位，二者交联良好，生成大的不可溶性免疫复合物的沉淀）检测法的基础上建立起来的。免疫学检验中最早应用的免疫沉淀反应是1984年Ouchterlony建立的琼脂双向扩散法（观察抗原孔与抗体孔之间是否出现沉淀线）。1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单向（辐射状）免疫扩散技术。并广泛用于血清蛋白质（IgG、IgA、IgM、补体C3、补体C4等）的定量检测。为了缩短检测时间，Laurell等于1966年建立了电免疫扩散法(俗称火箭免疫电泳，观察沉淀峰高度)，使报告结果的时间由单向免疫扩散法的≥24h缩短至4～5h。以上这些方法直到20世纪80年代末仍在临床广泛应用，但灵敏度(每1ml可检出最小量为“毫克”水平至“微克”水平)和精密度(变异系数≥10％)均较差，且操作繁琐、费时，不能自动化。

免疫比浊技术1967年便问世，但直到美国 Beckman公司推出的( immunochemistry systems，ICS)自动化检测系统被众多实验室接受后，这一技术才得到广泛的临床应用。

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