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摘 要

建立格隆溴铵原料药细菌内毒素的方法验证。根据《中国药典》中细菌内毒素检查方法。通过验证格隆溴铵原料药对细菌内毒素检查的干扰作用。首先称取一定量的格隆溴铵原料药用细菌内毒素检查用水将其溶解并稀释。选择两种不同厂家的λ=0.125EU/mL鲎试剂使用凝胶法进行预干扰实验后得到格隆溴铵浓度为0.00045mg/mL为其最小有效活性浓度，再通过两个不同厂家鲎试剂和三种不同批号的原料药进行三次正式干扰实验。最后得出使用格隆溴铵原料药稀释液对细菌内毒素反应没有干扰作用的结论，所以此方案有效。

关键词：格隆溴铵；细菌内毒素；鲎试剂；凝胶法；干扰作用

Method validation of bacterial endotoxin for glycopyrrolate API

Abstract

Establish method validation for bacterial endotoxin of glycopyrrolate.According to the bacterial endotoxin test method in the "Chinese Pharmacopoeia".The interference effect of glycopyrrolate API on bacterial endotoxin test was verified.First, weigh a certain amount of glycopyrrolate raw material medicinal bacterial endotoxin test water to dissolve and dilute it.Two different manufacturers of λ=0.125EU/mL limulus reagents were used for pre-interference experiment with gel method, and the glycopyrrolate concentration was 0.00045 mg/mL as the minimum effective active concentration, and then two different manufacturers’ limulus reagents and three different batches of APIs were subjected to three formal interference experiments.Finally, the glycopyrrolate crude drug dilution has no interference effect on the bacterial endotoxin reaction, so this scheme is effective.

Keywords: Glycopyrrolate， Bacterial Endotoxin， Limulus Reagent，Gel Method，Interference Effect

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 绪论 1

1.1 实验检测的意义 1

1.2 格隆溴铵产品的介绍 1

1.3 细菌内毒素的介绍 1

1.3.1 细菌内毒素概念 1

1.3.2 细菌内毒素的研究背景 2

1.3.3 细菌内毒素的特性 2

1.3.4 细菌内毒素检测方法 2

1.4 鲎试剂的介绍 2

第二章 实验内容 4

2.1 实验器具及仪器 4

2.1.1 除热源试管 4

2.1.2 超净工作台 4

2.1.3 恒温仪 4

2.2 试剂的选用 5

2.2.1 鲎试剂的灵敏度复核 5

2.2.2 细菌内毒素标准品的标定 7

2.3 格隆溴铵原料药的干扰预实验 7

2.3.1 格隆溴铵细菌内毒素限值 7

2.3.2 最低有效活性浓度的确定 8

2.3.3 溶液的配制 8

2.3.4 点样过程与结果的判断方法 9

2.4 细菌内毒素检查供试品的正式干扰试验 9

2.4.1 溶液的配制 9

2.4.2 点样过程 10

第三章 实验数据处理与结论 11

3.1 干扰预实验 11

3.1.1 实验结果 11

3.1.2 结论 11

3.2 正式干扰实验 11

3.1.1 数据处理与实验结果 11

3.2.2 三次干扰实验结论 11

第四章 总结 13

致谢 14

参考文献 15

第一章 绪论

1.1 实验检测的意义

本次课题主要对格隆溴铵原料药采用凝胶法进行细菌内毒素检验方法的验证。为了能够确保药品能够更好更安全地使用，通过使用鲎试剂产品中的细菌内毒素的限量是否符合人体所能承受的一种方法。目前医疗行业大多方法采用凝胶法对此进行检测，这种实验的原理是让内毒素与鲎试剂反应形成肉眼能分辩的凝胶，现如今这种方法被广泛应用于药品的半成品、原材料及医疗器具等产品的检查，对于还未放行的格隆溴铵原料药，首先要对其进行干扰试验，比较鲎试剂与内毒素在标准品溶液和样品溶液中反应的差异,即样品溶液对于内毒素检查是否存在干扰作用。

1.2 格隆溴铵产品的介绍

格隆溴铵是一种抗胆碱药，是一种能够有效的抑制胃酸分泌以及调节肠道蠕动的长效季铵类毒蕈碱受体拮抗剂^[1]，当今社会越来越多的人面临各种疾病的困扰，其中肝胆疾病问题尤为严重，目前市场上也有许多治疗肝胆疾病的药物。

一般来说格隆溴铵原料药是用来投用生产注射液或者注射用冻干产品，要确保格隆溴铵注射液打入人体不会使人产生不良影响，在制造原料药的过程中就应该确保其细菌内毒素限度值在合格范围内。若原料药合格后可采用了终端灭菌工艺可以保证药液在刚生产完时的无菌可以满足使用要求格隆溴铵注射液是根据的给药方式是静脉注射和肌肉注射，由于人体对静脉给药的小容量注射液本身的无菌要求非常高，且在药液大于等于2年的使用中，微生物还是可以得到滋长和繁殖，该类药液实际应用中难以达到长期无菌使用要求，因此若制成注射液，在制造原料药过程中就不能有差错。

在格隆溴铵的生产中加入了0.9%的氯化钠，从而增加了辅料使生产过程中这种产品产品生产的风险也大大提高。格隆溴铵原料药的浓度为0.2mg/mL，其中氯化钠的占原料药中浓度含量的45%，所以大量氯化钠的加入给格隆溴铵产品带来了高细菌内毒素的风险，从而影响了药液质量。所以说对格隆溴铵原料药的细菌肉毒素检查就显得格外重要。

为了能够保证今后格隆溴产品的细菌内毒素检查方法的准确性及可靠性，需要在实际检验条件中，验证格隆溴铵原料药对细菌内毒素检查试验是否会存在干扰作用，最终以确认这种方法能够适用格隆溴铵原料药产品的细菌内毒素检查。

1.3 细菌内毒素的介绍

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