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摘 要

本文应用荧光及紫外光谱法研究氟他胺与牛血清白蛋白 (BSA) 分子间的结合反应，讨论了氟他胺对牛血清白蛋白内源荧光的猝灭机理，测定了结合常数 (K_A = 3.56×10⁵ L·mol^-1) 和结合位点数 (n = 1.20)。实验表明：在室温下， pH = 7.4的缓冲溶液中，氟他胺对 BSA 内源荧光的猝灭机理为静态猝灭。 根据Fōrester 非辐射能量转移理论，求得能量转移效率 E 为 0.55，作用距离 r 为 0.37 nm。并且通过同步荧光技术考察了氟他胺对 BSA 构象的影响。

关 键 词：氟他胺，牛血清白蛋白，荧光光谱法

Abstract: The interactions between Flutamide and bovine serum albumin (BSA) were investigated by fluorescence and ultraviolet spectroscopy, discussing the Flutamide for endogenous fluorescence quenching mechanism of bovine serum albumin, determining the binding constant (K_A = 3.56×10⁵ L·mol^-1) and binding points (n = 1.20). The experimental results revealed that at room temperature, in the buffer solution pH = 7.4, the Flutamide has a strong ability to quench the intrinsic fluorescence of BSA and the interaction has been verified as consistent with the static quenching procedure. Based on the mechanism of the FÊrster energy transference, the transfer efficiency of energy E and transfer distance r between the acceptor TY and donor BSA were obtained at room temperature. (E = 0.55, r = 0.37 nm). And we also investigated the effect of Flutamide on the conformation of bovine serum albumin by synchronous fluorescence technique.

Key words: Flutamide, bovine serum albumin, fluorescence spectrometry

目 录

1 前言 3

2 实验部分 4

2.1 试剂与仪器 4

2.2 实验方法 4

3 结果与讨论 5

3.1 pH对反应体系的影响 5

3.2 氟他胺与BSA的荧光光谱 5

3.3 荧光猝灭机理及猝灭常数的测定 6

3.4 氟他胺与BSA作用的结合常数Ka、结合位点数n 7

3.5 氟他胺与BSA分子间的能量转移 9

3.6 氟他胺对BSA构象的影响 10

结论 13参考文献 14

致谢 15

1 前言

从不同角度研究以白蛋白为代表的蛋白质与具有生物活性小分子的相互作用目前已成为药物领域的研究热点之一。研究生物大分子与小分子之间相互作用，特别是具有生物的活性的药物小分子与生物大分子的相互作用，有助于了解药物在体内的运输和分布情况、阐明药物的作用机制及药物的毒副作用^[1]。药物与人类生活密切相关，药物的吸收、分布代谢及排泄等直接影响到药物在其作用部位的浓度和有效浓度的持续时间，从而决定着药物作用(药理作用和毒性作用)的发生、发展和消除。蛋白质是重要的天然生物大分子，也是生物体内具有重要生理功能的生物大分子，研究它可以让人们对生命过程和本质的认识大大提高。而血清白蛋白（bovine serum albumin, BSA）是血浆中含量最丰富的蛋白质，作为许多内源性和外源性化合物的存储和转运蛋白，可与许多化合物分子发生相互作用^[2]。各种药物浸入人体首先与血清白蛋白结合，通过血浆的存储和运输，到达受体部位产生药理作用。测定血清白蛋白的变化，可为疾病诊断、疗效观察提供有价值的资料和数据。

氟他胺 (Flutamide)，又名氟硝丁酰胺，氟他米特，缓退瘤，福至尔，氟利坦，是淡黄色针状结晶，其化学组成为2-甲基-N-[4-硝基-3-三氟甲基苯基]丙酰胺。氟他胺用于前列腺癌或良胜前列腺肥大，是非甾体类抗雄激素药物^[3]。除抗雄激素作用外，无任何激素的作用。其代谢产物小羟基氟他胺是其主要活性形式，能在靶组织内与雄激素受体结合，阻断二氢睾丸素（雄激素的活性形式）与雄激素受体结合，抑制靶组织摄取睾丸素，从而起到抗雄激素作用^[3]。但此作用可反馈性地引起FSH和LH释放增加，使睾丸酮的血浆浓度上升。当本品与促性腺激素释放激素（GnRH）如亮脯利特（leuprolide）一起使用时，可完全阻断雄激素而且防止代偿性增加。

常用的药物分析方法有重量分析法、滴定分析法、色谱分析法(包括柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法、离子交换色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、固相微萃取、高效毛细管电泳等)、光化学分析法(包括红外和紫外-可见分光光度法、荧光光谱法、化学发光法、磷光分析法、原子吸收光谱法、质谱法、共振光散射等) 、电化学分析法等。荧光法以其灵敏度高、选择性好、操作简便等优点受到分析工作者的青睐。将荧光光谱分析法应用于药物分析，已在药物有效成分分析鉴定、药物代谢动力学研究、临床药理与药效分析等方面取得长足发展。并广泛应用于生化分析、生物医学、临床分析等领域的痕量分析^[4]。光谱法特别是荧光光谱、同步荧光技术等已经成为研究生物大分子与小分子、离子相互作用的重要手段。通过荧光光谱技术可以获得蛋白质分子中荧光生色基团的种类、结构和所处微环境及其分布情况等有用信息，同时还可以得到外源物质与生物大分子相互作用的有关数据。

本文在模拟生理介质条件下，采用荧光法和紫外光谱法研究了氟他胺与 BSA结合反应的光谱特征，着重探讨氟他胺对牛血清白蛋白的荧光猝灭作用机制，计算了氟他胺与牛血清白蛋白结合常数、结合位点数及作用距离，并用同步荧光光谱研究了氟他胺对 BSA 构象的影响。

图1 氟他胺的分子结构

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