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摘 要

本文讨论透明质酸和聚谷氨酸的分子结构，理化性质，应用范围领域和主要生产方法进行介绍。并介绍了细胞培养的实验方法—MTT实验，包括其步骤，温度，环境的要求，注意事项。透明质酸通常用于化妆品中，因为透明质酸是具有优异保湿效果，在涂抹透明质酸后，可以使皮肤处于一种稳定的状态。研究发现，聚谷氨酸也是一种保湿效果优良的高端保湿成分，所以我们将透明质酸与聚谷氨酸进行了对比，比较哪个保湿度更好。将两种保湿剂以不同的浓度分别进行MTT实验，观察细胞存活率，对细胞毒性进行评价，判断哪种保湿哪种浓度更安全有效。

关键词：透明质酸 聚谷氨酸 保湿度 存活率 浓度

Cell culture of hyaluronic acid and polyglutamic acid extract

Abstract

The molecular structure, physical and chemical properties, application fields and main production methods of hyaluronic acid and polyglutamic acid are introduced.The experimental method of cell culture - MTT experiment was introduced, including its steps, temperature, environmental requirements and precautions.Hyaluronic acid is commonly used in cosmetics, because hyaluronic acid is a moisturizing ingredient with excellent moisturizing effect. After applying hyaluronic acid, the skin can be in a stable state.It is found that polyglutamic acid is also a high-end moisturizing ingredient with good moisturizing effect, so we compared hyaluronic acid with polyglutamic acid, which moisturizing effect is better.MTT experiments were carried out at different concentrations of the two moisturizers to observe the cell survival rate, evaluate the cytotoxicity, and determine which moisturizer concentration is safer and more effective.

Key words: hyaluronic acid polyglutamic acid Humidity retention survival rate concentration

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 绪论 1

第二章 文献综述 2

2.1透明质酸的概述 2

2.1.2透明质酸的物理性质 2

2.1.3透明质酸的应用 3

2.1.4透明质酸的生产方法 3

2.2聚谷氨酸的概述 3

2.2.1聚谷氨酸的分子结构 4

2.2.2聚谷氨酸的理化性质 4

2.2.3聚谷氨酸的应用 4

2.2.4聚谷氨酸的生产方法 5

第三章 透明质酸精华和聚谷氨酸精华液的制备 6

3.1实验原理 6

3.2实验试剂 6

3.4实验步骤及其配方 7

3.5保湿度的测试 8

第四章 透明质酸和聚谷氨酸精华液生物相容性评价 10

4.1实验目的 10

4.2实验试剂 10

4.3实验仪器 10

4.4实验试剂的配制 11

4.4.1 DMEM细胞培养基配制 11

4.4.2磷酸盐缓冲液（PBS）配制 11

4.4.4 MTT溶液的配制 11

4.5 MTT细胞实验 11

4.6 实验结果与结论 12

4.7细胞的冻存和复苏 13

4.7.1冻存原理 13

4.7.2冻存实验步骤 13

4.7.3冻存的注意事项 14

4.7.4复苏原理 14

4.7.5复苏操作步骤 15

4.7.6复苏的注意事项 15

第五章 总结与展望 16

5.1 总结 16

5.2 展望 16

参考文献 17

致谢 19

第一章 绪论

在角质层修复，屏障功能和皮肤营养吸收方面,讨论了保水在现代化妆品中的重要性。透明质酸及其衍生物可在皮肤表面形成透气，无阻塞的保水保湿膜。聚谷氨酸及其衍生物可以补充角质形成细胞的水分和保湿因子。聚谷氨酸和透明质酸不仅大量存在于人体皮肤中，它是一种天然保湿成分，含有在人体内，有助于恢复和保持皮肤的角蛋白屏障功能，是保湿化妆品的理想成分。

目前市场上的大部分保湿类化妆品，如洗发膏，护发素，沐浴露，精华乳液等都添加了保湿剂，我们最初用的保湿剂是甘油，甘油随着时间的推迟，挥发会越来越快，对皮肤组织起不到一定的保护作用。后来人们在人体内部发现了天然保湿剂透明质酸和聚谷氨酸，由于聚谷氨酸和透明质酸的保湿度很好，因此被广泛地使用。随着浓度的增大，溶液的保湿率逐渐增加，但并不是呈正比。尽管聚谷氨酸作为化妆品的保湿剂已经有了一定的应用，甚至被业界认为是可以媲美甚至优于透明质酸的保湿成分，但目前关于聚谷氨酸的保湿性的文献报道还很少，缺乏深入的研究。透明质酸的保湿性已为人知，但是为了探索发现更具有保湿性的产品，对皮肤能更好的起到保护，延缓衰老，我们进一步探索最新的产品，我们配制透明质酸和聚谷氨酸的精华，将透明质酸和聚谷氨酸精华液进行细胞培养培养实验，对细胞毒性进行评价，判断该是否可以作为美容针注射到皮肤里。

第二章 文献综述

2.1透明质酸的概述

Meyer等人是美国著名大学的眼科教授，他们是第一个通过牛眼睛玻璃体找到HA的，然后再进行分离^[1]。他们将之命名为“透明质酸”，1937年，Kendall等发现微生物发酵法可以制得HA，所以之后就有很多专家和研究者开始研究微生物发酵法，然后广泛的应用^[2]。 2.1.1透明质酸分子结构

透明质酸是具有线性结构的生物聚合物，由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡糖组成，它们之间是用β-1,3-糖苷键相互连接而成的，双糖之间则由通过β-1,4-糖苷键反复连接，其中两种单糖是等量摩尔比^[3]。然而，根据已经发表的文献综述中，我们查阅到，透明质酸是目前为止仅有的无硫粘多糖^[4]。Naro^[5]认为，高分子量HA定义为具有超过500个基本结构单元，低分子量HA通常指小于200kDa。Monslow等猜测了以下四种透明质酸的分子量，分别是：透明质酸高分子量（HMW HA）为＞1000kDa;透明质酸中等分子量(MMW HA)为250~1000kDa;透明质酸低分子量（LMW HA）为＞10~250kDa;寡聚透明质酸（oligo HA）为＜10kDa^[6]。

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