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竞争及双位点夹心Elisa对单克隆抗体表位鉴定的比较任务书

 2020-05-25 23:43:19  

1. 毕业设计(论文)的内容和要求

抗原表位又称抗原决定簇,它可以是由连续序列(蛋白质一级结构)组成或由不连续的蛋白质三维结构组成,决定抗原性的特殊化学基团。一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。抗原分子越大,决定簇的数目越多。但各种抗原的决定簇数目不同,如白喉类毒素有8个抗原决定簇,流感病毒有40多个抗原决定簇。抗原决定簇大多存在于抗原的表面,但也有隐藏在抗原内部的,如牛血清蛋白的抗原决定簇多于18个,但只有6个暴露在抗原表面,隐藏于抗原分子内部的抗原决定簇一般是无功能的。抗原分子在酶的作用下,使内部的抗原决定簇暴露出来,才能发挥抗原决定簇的作用。在单克隆抗体(McAb)的特性鉴定中,确定其对抗原构象表位(或抗原决定簇)的特异性是十分重要的。它可为抗原分子的结构和功能分析以及进行生物学方面的研究提供实验依据。

在对抗原表位的测定研究中首先要筛选出符合要求的抗原,抗体原料.一般需要亲和力较好,有多种抗原决定簇等。

选择好的抗原决定簇,应符合以下三点:

1.亲水性:大部分抗原决定簇是亲水性的;

2.处于结构表面:大部分抗体只与蛋白质表面部分结合;

3.有弹性:许多已知的抗原决定簇是在自由活动区域。

所以一般来说蛋白质的N端及C端是很好的抗原决定簇区域。

要求:

l 了解Elisa实验的基本原理,并熟练掌握。

l 查阅有关ELISA的书籍,文献,专刊等,掌握抗原表位的基本概念与作用。

l 在企业中实践,了解竞争抑制法和双位点夹心法的不同,以及对Elisa实验结果的影响。

l 积累经验根据实验原理提出假设影响因素,最后通过大量的实验对提出的假设因素进行分析验证。

2. 参考文献

[1] 刘曙照, 冯大和, 钱传范,等. 固相抗体直接竞争ELISA法测定小白菜和苹果中的甲萘威残留[J]. 农药学学报, 2001(4):69-73.

[2] 刘苹, 李平, 熊仁平,等. MTT法与BrdU ELISA法检测成纤维细胞增殖的可靠性比较[J]. 第三军医大学学报, 2006, 28(11):1262-1263.

[3] 郭甫坤, 李亦蕾, 吴曙光. Sandwich ELISA法测定NF-κB[J]. 中国药理学通报, 2000(02):227-228.

[4] 岳希全, 石宏, 李迎. ELISA法检测HBsAg影响结果的重要因素的分析[J]. 中国实验诊断学, 2007, 11(2):213-215.

[5]郑大勇, 罗荣城, 韩焕兴. 非竞争性ELISA法测定人源抗HBsAg Fab功能性亲和常数[J]. 解放军医学杂志, 2004, 29(2):110-112.

[6]郭可謇, 宋光远, 张礼璧. 应用抗体捕捉ELISA法测定病毒特异性IgM抗体[J]. 病毒学报, 1987.

[7] 徐志凯. 《实用单克隆抗体技术》[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 1991(3).

[8] 杨安钢. 生物化学与分子生物学实验技术[M]. 高等教育出版社, 2001.

3. 毕业设计(论文)进程安排

起讫日期

设计(论文)各阶段工作内容

备 注

2015.12.31前

下达课题任务,查阅文献,做好开题前期准备工作;

2015.12.31-2016.1.15

完善课题研究方案,完成外文翻译、文献综述和开题报告工作,组织开题论证和初期检查工作;

2016.1.15-2016.6.7

课题的实验、设计、调研及结果的处理与分析,完成毕业论文和答辩PPT的写作;

2016.6.7-2016.6.14

课题论文答辩。

2016.6.14-2016.7.8

完成毕业设计(论文)教学质量的分析、总结和评优工作,做好材料的收集、整理和归档工作。

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