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摘 要

葡聚糖在食品、医疗等方面有着广泛的用途，且不同分子量的葡聚糖也有着不同的应用，本文探究采用多膜耦合的方法分离出8000分子量左右的葡聚糖，并进行内毒素检测，如符合药典要求，则可投入使用。

将粗酶液与蔗糖反应体系催化4h，蔗糖基本可完全转化成葡聚糖和果糖，将转化液煮沸，去除蛋白质沉淀，之后将转化液依次通过微滤膜、10000分子量超滤膜和4000分子量超滤膜，前膜的过滤液作为后膜的原料液，最后收集各部分液体，进行测定。最终葡聚糖的收率在31.45%，蛋白基本去除。但是内毒素检测未通过，需改进实验操作。后期考虑先将酶液提纯，对比两种酶液的催化结果有何差异，进行膜分离条件优化实验，确定最佳分离条件，并考虑更换无机陶瓷膜，与有机膜的结果进行对比。此外，蔗糖催化反应形成的果糖，考虑探究是否可收集并通过其他工艺制备部分医用右旋糖酐。

关键词：葡聚糖 多膜耦合分离 内毒素检测

Multi-membrane coupling separation of dextran and removal of endotoxin

Abstract

Dextran has a wide range of uses in food, medical and other aspects, and dextran with different molecular weights also has different applications. This article explores the use of multi-membrane coupling to separate glucans with a molecular weight of about 8000 and perform endotoxin detection If it meets the requirements of the Pharmacopoeia, it can be put into use.

The reaction system of crude enzyme solution and sucrose was catalyzed for 4h, and sucrose could be basically completely converted into dextran and fructose. The conversion solution was boiled to remove protein precipitates. After that, the conversion solution was sequentially passed through microfiltration membrane, 10000 molecular weight ultrafiltration membrane and 4000 molecular weight The ultrafiltration membrane and the filtration liquid of the front membrane are used as the raw material liquid of the rear membrane. Finally, each part of the liquid is collected and measured. The final glucan yield was 31.45%, and the protein was basically removed. However, the endotoxin test failed, and the experimental operation needs to be improved. In the later stage, consider purifying the enzyme liquid first, comparing the difference between the catalytic results of the two enzyme liquids, conducting the optimization experiment of membrane separation conditions to determine the optimal separation conditions, and considering replacing the inorganic ceramic membrane with the organic membrane. In addition, fructose formed by sucrose catalyzed reaction is considered to explore whether it is possible to collect and prepare some medical dextran by other processes.

Key Words：Dextran；Multi-membrane coupling separation；Endotoxin detection

目 录

摘要 I

ABSTRACT II

第一章 绪论 1

1.1 葡聚糖概述 1

1.2 葡聚糖理化性质 1

1.3 葡聚糖应用 1

1.4 葡聚糖制备和提取 2

1.4.1 直接发酵法制备 2

1.4.2 酶法制备 3

1.4.3 直接提取法制备 3

1.4.4 酵母中制备 3

1.4.5 水提法提取 3

1.4.6 碱性酶提法提取 4

1.4.7 微波法提取 4

1.4.8 超声法提取 4

1.4.9 超高压提取法 4

1.5 葡聚糖分离纯化 4

1.5.1 传统分离多糖的方法 5

1.5.2 膜分离技术概述 5

1.5.3 多膜耦合分离葡聚糖 7

1.6 葡聚糖分离结果测定 7

1.6.1 葡聚糖含量测定 8

1.6.2 葡聚糖分子量测定 8

1.6.3 蛋白质含量的测定 8

1.7 内毒素 9

1.7.1 内毒素检测 9

1.7.2 内毒素去除 9

第二章 材料和方法 10

2.1 实验仪器与材料 10

2.2 酶催化 10

2.2.1 试剂和材料的准备 10

2.2.2 催化反应过程 10

2.3 膜分离 10

2.4 内毒素检测 11

2.4.1 试剂准备 11

2.4.2 检测步骤 12

第三章 结果与分析 13

3.1 酶催化实验结果 13

3.2 酶催化实验结果分析 13

3.3 膜分离实验结果 13

3.4 膜分离实验结果分析 14

3.4.1 多糖分离结果分析 14

3.4.2 蛋白分离结果分析 14

3.5 内毒素检测实验结果 14

3.6 内毒素实验结果分析 14

第四章 展望 13

4.1 酶催化实验展望 16

4.2 膜分离实验展望 16

参考文献 17

致谢 19

第一章 绪论

葡聚糖，高分子多糖化合物，由葡萄糖单元脱水形成｡葡聚糖的纯度在临床应用中要求比较高，而纯度如果不够或内毒素含量过高则会引发严重的副作用。目前，国内葡聚糖的纯化主要采用传统的乙醇沉淀法，但该种方法，消耗有机溶剂的量大，沉降耗时长，收率不高，浪费原料，污染环境等。为了避免以上问题，以及获得更加精制的产品，现采用膜分离技术。通过多膜耦合分离技术，使用多级中空纤维膜装置对葡聚糖粗品进行分离纯化，并且调整分离条件，以达到最优条件，使产物达到高纯度的同时保证高收率。

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