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摘 要

碱性蛋白酶是一种重要的工业酶，广泛使用于各个行业中。为提高产酶活力，采单因素实验，对影响产碱性蛋白酶的因素进行研究分析。将分离纯化的菌株，接种到脱脂牛奶琼脂培养基，通过观察菌株生长，测定水解圈直径（d）和菌落直径（D）的比值来进行产碱性蛋白酶细菌的初筛，通过福林-酚法测定A680，根据酪氨酸标准曲线计算酶活力来进行产碱性蛋白酶细菌的复筛。采用单因素实验的方法，对细菌产碱性蛋白酶条件（培养温度、装液量、pH、培养时间）进行优化。测定不同条件下的酶活力，观察酶活力曲线确定最佳培养条件。结果表明培养温度37℃，装液量20 ml，初始pH 8，培养时间24 h为最佳培养条件。同时满足这些条件酶活力将达到最高，碱性蛋白酶产量达到最大。

关键词：碱性蛋白酶 菌株 单因素 培养条件

Abstract

Alkaline protease is a kind of important industrial enzymes, which is widely used in washing, tanning, brewing and so on, has played an important role. In order to improve the activity of enzyme production, single factor experiments were carried out to study the factors that affect the production of alkaline protease. The isolated and purified strains, inoculation to skim milk agar medium, through the observation of strain growth, the ratio of colony diameter (D) and hydrolytic circle diameter (d) was determined to carry out the screening of bacteria producing alkaline protease.a680 was determined by the Folin phenol method, according to the tyrosine standard curve calculation of enzyme activity of alkaline protease producing bacteria rescreened. Single factor experiment was used to optimize the conditions of alkaline protease (culture temperature, liquid volume, pH, culture time). The enzyme activity was determined under different conditions, and the optimum culture conditions were determined by observing enzyme activity curve. The results showed that the culture temperature was 37 degrees C, the liquid loading amount was 20 ml, the initial pH 8, the culture time of 24 h was the best culture condition, and the enzyme activity was the highest, and the alkaline protease production reached the maximum.

Key words ：Alkaline protease; strain; single factor; optimization.

目录

摘要 Ⅰ

Abstract Ⅱ

第一章 文献综述 1

1.1 碱性蛋白酶的介绍、理化性质、生产状况、优化及应用前景 1

1.1.1 介绍 1

1.1.2 理化性质 2

1.1.3生产状况 3

1.1.4优化 5

1.1.5应用前景 5

第二章 实验方法 7

2.2 实验材料与仪器 7

2.2.1 实验材料 7

2.2.2 实验仪器 7

2.2 实验方法 8

2.2.1产碱性蛋白酶细菌的初筛 8

2.2.2产碱性蛋白酶细菌的复筛 9

2.2.3 培养条件对菌株产酶能力的影响 9

第三章 实验结果 11

3.1 产碱性蛋白酶细菌的初筛 11

3.2 产碱性蛋白酶细菌的复筛 12

3.2.1 标准曲线的制作 12

3.2.2 酶活力测定 12

3.3 培养条件对菌株产酶能力的影响 13

3.3.1 培养温度对菌株产酶能力的影响 13

3.3.2 装液量对菌株发酵产酶的影响 13

3.3.3 培养基起始pH值对菌株产酶能力的影响 14

3.3.4 培养时间对菌株产酶能力的影响 15

第四章 结论与展望 16

4.1 结论 16

4.2 展望 16

参考文献 17

致谢 19

第一章 文献综述

1.1碱性蛋白酶的介绍、理化性质、生产状况及应用前景

1.1.1碱性蛋白酶介绍

碱性蛋白酶在猪胰脏中第一次发现，这一类酶能够在pH偏碱性下水解蛋白质。这种酶在动物、植物和微生物中都存在。1945年，微生物产碱性蛋白酶在地衣芽孢杆菌中被发现了。目前，解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜碱性芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和霉菌，以及一些低温菌，如假单胞菌属、异单孢菌属、耶尔森氏菌属、黄杆菌属、芽孢杆菌属、希瓦氏菌属等都有碱性蛋白酶的存在，其中一些已成为工业微生物酶，被广泛应用于洗涤、食品、皮革、废物处理等行业中^[1]。

碱性蛋白酶是一种在碱性条件下有活性并且能水解蛋白质的酶类，是最广泛使用的和最高产量的一类蛋白酶，是一种商业上重要的酶。但是，很多碱性蛋白酶在许多工业应用中存在的局限性， 如培养基的成本约占工业化碱性蛋白酶的30%～40%以及含有阴离子表面活性剂和氧化剂的环境中活力和稳定性较低。

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