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摘 要

在使用以PS-DVB为基质的高聚物型色谱柱,通过反相高效液相色谱法分离葛根提取液中的大豆苷元和葛根素的基础上，研究了高聚物型色谱柱一步分离制备纯化葛根素提取液的方法。成果显示在2-50μg/ml浓度范畴内葛根素线性关系良好，回归方程是y_葛根=1.3422x-1.0184，线性相关系数是0.999；在2-20μg/ml浓度范围内大豆苷元的线性关系良好，回归方程为y_大豆=2.275x 0.8695，线性相关系数为0.999。葛根素和大豆苷元的得率分别可达95.9%和78.5%。本方法能够直接一步纯化制备得大豆苷元和葛根素，简便并且准确。

关键词：聚苯乙烯-二乙烯基苯；反相高效液相色谱法；高聚物型色谱柱；葛根素；大豆苷元，制备纯化

Production and Purification of Puerarin extract

Abstract

In order to use the PS-DVB polymer-type columns as a matrix phase high performance liquid chromatography based Gegen extract puerarin and daidzein on the study of polymer-type columns separate preparation step Kudzu methods prime puerarin and daidzein. The results showed that in 2-50μg / ml concentration range puerarin linear regression equation is y Pueraria = 1.3422x-1.0184, the linear correlation coefficient is 0.999; within 2-20μg / ml concentration range of good linearity daidzein the regression equation was y soy = 2.275x 0.8695, linear correlation coefficient of 0.999. Yield puerarin and daidzein were up 95.9% and 78.5%. This method can be further purified preparation obtained directly puerarin and daidzein, simple and accurate.

Keywords: polystyrene - divinylbenzene; polymer-type columns; RP-HPLC; puerarin; daidzein;production and purification

目录

摘要 I

Abstract II

第1章 引言 1

1.1葛根 1

1.2葛根中的两种主要的有效成分 2

1.2.1葛根素的性质和意义 2

1.2.2大豆苷元的性质和意义 2

1.3葛根的作用和提取制备 3

1.3.1葛根的保健作用研究 3

1.3.2葛根中葛根素的提取制备 4

1.3.3高聚物型色谱柱（MKF-RP-HH） 5

1.4研究现状 6

1.5选题的意义 7

1.6前景与展望 7

第2章 实验部分 9

2.1 实验材料、试剂及仪器 9

2.2实验方法 9

2.2.1液相色谱条件 9

2.2.2葛根素与大豆苷元的混合对照品溶液、葛根提取液的配置 9

2.2.3标准品储备液及标准品溶液的配置 10

2.2.4 葛根素和大豆苷元的收集和浓缩 10

2.2.5半制备柱收集葛根素和大豆苷元 11

第3章 结果与讨论 12

3.1制备条件的选用 12

3.2葛根素和大豆苷元的定性 12

3.3 标准曲线绘制 13

3.4 收集液中葛根素和大豆苷元得率的考察 15

结论 17

致谢 18

参考文献 19

第1章 引言

葛根本身是野葛、甘葛藤的干燥根，野葛、甘葛藤属于豆科植物，早在本草纲目中就提到过葛根可入药^[1]，在现代医学中，较多权威资料如《中药大辞典》等著述，其具有以下药理作用：扩张冠状动脉和脑血管、降血糖血脂、抗脂质过氧化和消除自由基、预防老年痴呆等作用^[1-4]。提取液中的关键有用物质为大豆苷元和葛根素等异黄酮类化合物，而这种化合物纯度较高的话更具有药用价值。但是各类天然葛根中不只是有异黄酮类化合物，还含有其他成分，有些成分是有毒的^[5]。为了使得到的异黄酮类化合物纯度较高，研发人员广泛关注葛根素的检测、制备技术。制备葛根提取液使用的十八烷基硅烷键合的硅胶为填料的色谱柱，常用的方法是用反相高效液相色谱法^[6]，，该基质填料不耐酸、碱、不耐水，污染严重，不好清洗和不好再生^[7]，易对样品造成不可逆吸附而拖尾^[8]。本实验中的高聚物型色谱柱所用填料的结构是聚苯乙烯二乙烯基苯，其结构耐酸、碱和耐水，易清洗再生^[9]，且无不可逆吸附。特别是在良溶剂作用下也可抗溶胀，耐40MPa的压力。文献中多为使用硅胶型色谱柱分离分析葛根提取液，而纯化制备时却更换另类填料及重新优化选择流动相条件，极为繁琐。本工作通过选用基质为聚苯乙烯二乙烯基苯的高聚物型色谱柱直接应用纯化制备。

1.1葛根

葛根，中药名，又叫野葛，来自于豆科植物野葛，味干、甘、辛，凉。采集挖收获于秋、冬季节，需在鲜嫩的时间里切成小块或厚的片状。有缓解肌表症状，降低体温，排泄疹毒，止泻，止渴的功能^[10]。常用于发热，肌肉疼痛，热病口渴，热泻，脾虚泄泻^[11]。属于粗壮藤本，大概8米长，呈黄色有硬毛，根呈块状，十分粗厚。荚果外形椭圆， 5-9厘米长，8-11毫米宽，扁平，呈褐色有硬毛。花期9-10月，果期11-12月。生长于山坡的

草丛或路旁草丛及比较阴湿的地方，或者生长于海拔1000-3200米的山沟林中。全世界大约有二十种葛根属植物。在我国地理分布主要在南方的广东、贵州、云南等省,我国主要是野葛、粉葛^[12]。葛根的淀粉含量最高可为76.144%，淀粉的比例高,而且通过葛根提取出质量很好。从古代到现代，在民间都有吃的记录，在《圣惠方》、《本草衍义》中都有记载^[13]。中国南边地区人们夏日常常喝的就葛根煎的汤，非常解渴。葛根片含有大量的黄酮类物质(天然植物雌激素)、多糖体、蛋白质、磷脂质等营养成分^[14]。葛根有多种用途如制作保健药品、加工成食品和编制葛布。常常吃葛粉能够改善体质，调节人体机能，提升免疫力，抵抗衰老、延年益寿，保持活力^[15]。

1.2葛根中的两种主要的有效成分

1.2.1葛根素的性质和意义

葛根素,属于黄酮类物质。葛根中含量最高的是葛根素。现代药理实验发现其具有增加脑血流量,减少脑血管阻力,缓解心痛， 抗心率失常,抗氧化,增加超氧化歧化酶( SOD) 活性^[16]。葛根素具备扩展脑部血液流通管道、降血糖血脂、消除游离基和抗脂质过氧化、预防老年痴呆等作用，因而葛根素在日常生活中还是非常重要的^[17]。

葛根素结构图

1.2.2大豆苷元的性质和意义

在黄酮类化合物中，大豆苷元属于异黄酮部分，还被分类于植物雌激素里。在豆科植物中主要能产生大豆苷元，例如黄豆等。由于其化学药理性非常广，便被大量用来制造药物制剂、食物和化妆品等。大豆苷元进入体内能够迅速被吸收并代谢，由于其口服生物利用度低，以及较弱的生物活性等因素，大豆苷元的广泛使用受到了限制。大豆苷元外观是固体形状，在水中不能溶解。有利于抗心律失常，减少心肌耗氧量，可以提高冠脉的流量，降慢心律和血管扩张作用，并且有不错的抑菌作用，主要针对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌^[18]。因而，转变大豆苷元的水溶性或脂溶性，提高生物利用度、改善其药理活性，扩大大豆苷元应用规模，成为主要的研究方向。

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