论文总字数：18053字

摘 要

基因工程已经被广泛应用于农业、畜牧业、医药及环保等领域^[1],其在生物制药、基因诊断和基因治疗、遗传病的预防、疾病相关基因的发现与克隆等方面所取得的成果，极大地改变了人类自身及其生活的面貌。本文主要探究在平常实验过程中中，经常会遇到一些GC含量过高，过低，甚至一些含有POLYTA结构的难度基因。GC含量过高的基因氢键很难打开，一般的聚合酶链式反应很难扩增出想要的片段。GC含量低的基因氢键却易于打开，及其容易发生基因突变，很难获得目的基因。还有一些结构基因，更加没有办法轻易的合成到。这些难度基因是生产过程中无法避免的一些问题。

所以，提高聚合酶链式反应的成功率是很迫切的事情。

关键词：基因合成 聚合酶链式反应 难度基因 POLYTA

Method for improving the success rate of polymerase chain reaction in molecular biology

Abstract

Gene engineering technology revolution is a industrial and informationize revolution, which has a far-reaching impact on human society. Gene engineering has been widely used in the field of agriculture, animal husbandry, medicine and environmental protection etc^[1], The obtained results in the bio-pharmaceutical, gene diagnosis,gene therapy,genetic disease prevention and disease related gene discovery and cloning have greatly changed the face of human beings and the life. In this paper, we mainly explore the difficult genes featured that the GC content is too high or too low, and even some containing POLY structure in the ordinary course of the experiment.The high GC content causes gene hydrogen bond is difficult to interrupt.The general poly chain reaction is difficult to amplify the desired fragment. The low GC content of the gene is easy to interrupt and it is easy to lead to gene mutation.It is difficult to obtain the target gene. So there are a number of structural genes being difficult synthesized. However these difficult problems are that can't be avoided in the production process.

So by changing the polymerase chain reaction in certain conditions or adding some reagents in the polymerase chain reaction, gene of synthesis to improve the success rate of the polymerase chain reaction method is pressing .

Key words: gene synthesis;difficult gene;POLYTA

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 概述 1

1.1聚合酶链式反应的概述 1

1.1.1聚合酶链式反应的简介 1

1.1.2聚合酶链式反应的基本反应步骤 1

1.1.3 实验操作的基本过程 2

1.2探究提高聚合酶链式反应成功率的意义 3

1.2.1难度基因 3

1.2.2高GC 3

1.2.3低GC 3

1.2.4 POLY结构 3

1.2.5本课题的研究思路 4

第二章 实验材料与方法 5

2.1实验材料 5

2.1.1实验仪器和器材 5

2.1.2实验试剂和耗材 5

2.2实验步骤 6

2.2.1第一轮聚合酶链式反应（拼接引物） 6

2.2.2引物混合液的准备 6

2.2.3第一轮聚合酶链式反应反应工作液配制 6

2.2.4第一轮聚合酶链式反应反应体系的配制 6

2.2.5第一轮聚合酶链式反应反应程序设置 7

2.2.6第二轮聚合酶链式反应（基因扩增） 7

2.2.7第二轮聚合酶链式反应反应工作液配制 7

2.2.8第二轮聚合酶链式反应反应体系配制 7

2.2.9第二轮聚合酶链式反应反应程序设置见 8

2.3聚合酶链式反应反应优化剂的影响 8

2.3.1DMSO浓度对聚合酶链式反应扩增反应的影响 8

第三章 实验步骤与数据 11

3.1改变退火温度（高GC） 11

3.1.1反应体系 11

3.1.2反应梯度 11

3.1.3二轮体系 11

3.1.4 点胶拍图 11

3.2改变退火温度（低GC） 12

3.2.1反应体系 12

3.2.2反应梯度 12

3.2.3二轮体系 12

3.2.4点胶拍图 13

3.3改变时间（高GC） 13

3.3.1反应体系 13

3.3.2反应梯度 13

3.3.3二轮反应 13

3.3.4点胶拍图 14

3.4改变反应时间（低GC） 14

3.4.1反应体系 14

3.4.2反应梯度 14

3.4.3二轮反应 15

3.4.4点胶拍图 15

3.5添加DMSO（高GC） 15

3.5.1反应体系 15

3.5.2反应梯度 16

3.5.3二轮反应 16

3.5.4点胶拍图 16

第四章 结果与讨论 18

4.1对于高GC难度基因的合成最适反应条件 18

4.2对于低GC难度基因的合成最适反应条件 18

4.3退火温度 18

4.3.1高GC类型 18

4.3.2低GC类型 18

4.3.3poly结构 19

4.4改变反应时间 19

4.4.1高GC类型 19

4.4.2低GC类型 19

4.5 添加聚合酶链式反应优化剂 19

4.5.1高GC类型 19

第五章 总结与展望 20

5.1总结 20

5.2展望 20

参考文献 22

致 谢 25

第一章 概述

1.1聚合酶链式反应的概述

1.1.1聚合酶链式反应的简介

聚合酶链式反应简称聚合酶链式反应。是一种快速简洁的基因合成方式。聚合酶链式反应已经极大程度的运用到了人们的生产生活中。对生产已经在产生了十分深远的影响，是很多大型的生物公司必须具备并且必须成熟的技术体系。具备聚合酶链式反应成熟的技术必须是成功生产的基本条件之一。

通过聚合酶链式反应可以用来检测病毒，生产创新型药物，对人类的基因组进行测序，这些都有利于人类对生命进一步的了解。对人类对生命的本质会有更加本质的更为科学的依据。

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