论文总字数：18662字

摘 要

藏红花（Crocus sativus L.）又称番红花、西红花，是鸢尾科番红花属球根类多年生草本植物。藏红花能活血化瘀、散郁开结，在抗肿瘤方面也具有良好疗效。但藏红花只是柱头入药，产量极低；又因为其资源极其有限，致使其价格昂贵。利用植物细胞培养技术生产藏红花素等活性物质成为解决藏红花资源的有效途径之一。

实验考察了培养基中氮源对藏红花悬浮培养细胞的生长和藏红花色素合成的影响。通过测定藏红花细胞生物量和色素含量来判断不同总氮水平和不同NO₃^-/NH₄ 比和不同补料方式和时间对细胞生长和色素合成的影响。通过测定硝酸还原酶活性来判断添加MJ对硝态氮吸收利用的影响。结果表明，不同的C/N比和NO₃^-/NH₄ 比对藏红花细胞生长和色素合成都有影响。24d补NO₃^--N能促进藏红花细胞生长和色素合成。还发现了添加MJ能降低硝酸还原酶的活性。

关键词：藏红花 茉莉酸甲酯 氮源 藏红花色素 硝酸还原酶

Abstract

Saffron (Crocus sativus L.) is the Iridaceae crocus bulb perennial herb.Saffron has a strong role in promoting blood circulation and San Yu open knot efficacy and cancer; But just saffron stigmas medicine, the yield is very low; and because of its very limited resources, leading to its high price.Use of plant cell culture technology to produce saffron factors and other active substances become one of the effective ways to solve saffron resources.

The influence of the different contents of nitrogen sources in the culture medium to the suspension cultured saffron cells’ growth and the pigment synthesis.The influence of the different total nitrogen levels,different ratios of NO₃^-/NH₄ and different ways and time to feed to the suspension cultured saffron cells’ growth and the pigment synthesis by measuring the biomass and pigment content of saffron cells.The influence of adding methyl jasmonate to the nitrate reductase activity is judged by measuring the nitrate reductase.The result shows that,the different ratios of C/N and NO₃^-/NH₄ have different influence to the saffron cells’ growth and the pigment synthesis.It can promote the growth of saffron cells and the synthesis of pigment if feed NO₃^--N at 24^th day.The fact the adding methyl jasmonate can reduce the nitrate reductase acticity has also been proved.

KEYWORDS:saffron; methyl jasmonate; nitrogen source; saffron pigment; nitrate reductase

目录

摘 要 II

Abstract III

目录 IV

第一章 文献综述 1

1.1 藏红花简介 1

1.2 藏红花主要化学成分 1

1.3 藏红花的药理研究 2

1.4 解决藏红花资源短缺的途径 3

1.5 植物细胞培养生产次生代谢产物调控研究 4

1.6 细胞培养中的氮代谢研究 4

第二章 实验材料和方法 7

2.1 实验材料 7

2.1.1 藏红花愈伤组织 7

2.1.2 培养基^[39] 7

2.1.3 仪器 7

2.2 实验方法 8

2.2.1 藏红花愈伤组织继代培养 8

2.2.2 藏红花细胞悬浮培养 8

2.2.3 藏红花悬浮培养细胞诱导子处理 8

2.3 藏红花色素的分析比较 8

2.3.1 生物量的测定 8

2.3.2 藏红花色素的提取和测定 8

2.3.3 粗酶液中蛋白含量测定 9

2.3.4硝酸还原酶活性（NRA）的测定 9

第三章 结果与讨论 11

第四章 结论与展望 15

4.1 结论 15

4.2 展望 15

参考文献 17

致 谢 21

第一章 文献综述

1.1 藏红花简介

藏红花，又名西红花、番红花，是鸢尾科番红花属多年生球茎草本植物，是一种名贵的药用植物，在欧亚被广泛用作妇科良药。早在公元1550年，《埃伯斯纸草书》中就将藏红花记载为药用植物。藏红花也是食品、化妆品、日用化工、染料工业与香料制品产业中广泛使用的原料。原产于西班牙、印度、伊朗、意大利等国家 ^[1]。藏红花的药用价值非常高，但是只取其柱头入药，而藏红花由于本身生长条件限制，产量非常低，所以价格十分昂贵，被誉为“植物黄金”。

近年来，经研究发现，藏红花素、藏红花苦素、藏红花醛和藏红花酸这些藏红花柱头中含有的成分具有良好的抗癌效果，因此在新型抗癌药物的研究中藏红花已经成为研究热点^[2,3] 。

1.2 藏红花主要化学成分

对藏红花有效成分的研究发现，藏红花柱头中含有藏红花素、藏红花酸、藏红花苦素、藏红花醛等成分^[4-5] 。在藏红花的代谢途径中，藏红花酸、藏红花苦素和一些挥发油是由玉米黄质降解得到的；藏红花苷等水溶性色素是由藏红花酸进一步糖苷化得到的；藏红花醛等一系列挥发油是由藏红花苦素经过进一步降解氧化得到的。

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