论文总字数：13360字

摘 要

[目的]探究毒力基因和Ⅰ类整合子在肠道外大肠杆菌中的分布情况，检测肠道外大肠杆菌对9种常见抗生素的耐药情况，并分析三者间的关系。[方法]运用PCR的方法，设计合适的引物，以基因组DNA为模板进行扩增，确定毒力基因papC、fimH、hly、cnf1和aer在46株肠道外大肠杆菌中的分布情况；运用PCR的方法，设计合适的引物，以基因组DNA为模板进行Ⅰ类整合酶基因（Int1）的扩增，以Int1阳性菌株DNA为模板进行Ⅰ类整合子可变区（cassette）的扩增，对阳性片段回收测序，并与GenBank收录序列进行比对，确定基因盒的种类；用纸片扩散法对9种抗生素进行药敏试验。[结果]papC、fimH、hly、cnf1和aer的检出率分别为52.17%、84.8%、10.9%、26.1%和47.8%；含Int1的菌株占总量的34.78%（16/46），含基因盒的菌株占Int1阳性株的56.25%（9/16），基因盒主要分为两种，一种为aadA1 dfr11（1614 bp），另一种为aadA5 dfr17（1715 bp），aadA基因盒对氨基糖苷类耐药，dfr基因盒对甲氧苄啶耐药。耐药率高的抗生素包括氨苄西林（80.43%）、头孢噻吩（73.91%）、头孢唑林（65.22%）。

关键词：肠道外大肠杆菌，毒力基因，耐药性，整合子

Abstract：[Objective] To explore the distribution of virulence gene and type I integron in enteric Escherichia coli, and detect the resistance of extraintestinal Escherichia coli to nine common antibiotics and analyze the relationship between the three. [Methods] PCR method was used to design appropriate primers and to amplify the genomic DNA as a template to determine the distribution of virulence genes papC, fimH, hly, cnf1 and aer in 46 strains of extraintestinal E.coli, and the appropriate primers were designed with the method of PCR to carry out class I integrase gene (Int1) . Amplification, the Int1 positive strain DNA was used as the template to amplify the cassette of class I, and the positive fragment was purified and sequenced, and compared with the GenBank sequence, the type of gene box was determined, and the drug sensitivity test of 9 kinds of antibiotics was carried out by the paper diffusion method. [Results] Genes papC, fimH, hly, cnf1 and aer were found 52.17%, 84.8%, 10.9%, 26.1% of all strains and Int1 was 47.8%, and 34.78% (16/46), 56.25% (9/16) of the of Int1 were amplified with variable cassettes. The cassettes composition were aadA1 dfr11 (1614 bp) and aadA5 dfr17 (1715 bp), aadA gene cassettes are resistant to aminoglycosides, and dfr gene cassettes are resistant to trimethoprim. Drug resistance results include ampicillin (80.43%), cefotaxime (73.91%) and cefazolin (65.22%).

Keywords：extraintestinal Escherichia coli，virulence genes，drug resistance，Integron

目 录

1 前言 4

2 材料 4

2.1 菌株来源 4

2.2 引物 5

2.2 药敏材料 5

2.3 试剂与仪器 5

3 方法 5

3.1 耐药基因的检测 5

3.1.1 模板的制备 5

3.1.2 PCR反应 6

3.2 I类整合子的检测 6

3.2.1 I类整合子保守区的检测 6

3.2.2 I类整合子可变区的检测 6

3.3 药敏试验 7

4 结果 7

4.1 毒力基因的检测结果 7

4.1.1 毒力基因的分布情况 7

4.1.2 毒力基因的组合情况 9

4.2 Ⅰ类整合子的检测结果 11

4.2.1 Ⅰ类整合子保守区的检测结果 12

4.2.2 Ⅰ类整合子可变区的检测结果 12

4.3 药敏试验的检测结果 13

4.3.1 耐药情况分析 13

4.3.2 耐药模式分析 14

4.4 UPEC的毒力基因与耐药性的关系 15

4.5 Ⅰ类整合子与耐药性的关系 16

5 讨论 17

5.1 毒力基因与耐药性之间的探讨 17

5.2 整合子和耐药表型之间的探讨 17

参 考 文 献 19

1 前言

人的大肠杆菌感染主要分为肠道感染和肠道外感染。肠道感染主要是大肠杆菌通过受污染的手指、食物等途径进入胃肠道，可引起腹泻，严重者会导致霍乱样症状。肠道外感染以尿路感染为主，还可引发阑尾炎、胆囊炎等。尿路感染是临床上常见的一种疾病，引起泌尿道感染的病原菌较多，其中大肠杆菌是一类重要的病原菌。

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