论文总字数：11128字

摘 要

新疆风味调和茶是保健茶类的一种，已有1600多年的历史传承，2014年被列入新疆自治区级非物质文化遗产。本试验以印度豆蔻、红花、玫瑰花、丁香、薄荷、小茴香、甘草、干姜、姜黄、茯砖茶配制成调和茶，测定其基本理化指标，以GC-MS对香气成分进行分析，以多酚为加工工艺指标，利用Box-Behnken法优化加工工艺，以Fe³ 还原能力、ABTS 自由基清除能力、DPPH·自由基清除能力和对H₂O₂氧化损伤HepG2细胞的保护作用来考察抗氧化活性，以RAW 264.7巨噬细胞作为探讨基础，研究免疫活性调节能力。

关键字:新疆风味调和茶，免疫调节

Abstract:Xinjiang medicinal tea is a type of health tea, which has a history of more than 1600 years. In 2014, Uyghur reconstituted tea was included in the Xinjiang Uyghur Autonomous Region intangible cultural heritage. In this experiment, Xinjiang tea was prepared from cardamom, safflower, rose, clove, peppermint, cumin, licorice, ginger, turmeric and Fuzhuan tea. The basic physical and chemical indexes were determined by the latest published national standards. The components of tea aroma were analyzed. Tea polyphenols was used as the processing technology index. The Box-Behnken method was used to optimize the processing technology. The effects of Fe³ reduction, ABTS scavenging ability, DPPH· free radical scavenging ability and HepG2 cell injury by H₂O₂ oxidative injury to examine the antioxidant activity of RAW 264.7 macrophages as a basis for the study of immune regulatory capacity.

Key words:Xinjiang medicinal tea,immunomodulation

目 录

1 引言 1

2 材料与仪器 1

2.1 材料 1

2.2 试剂 1

2.3主要仪器 1

3 试验方法 2

3.1 调和茶样品制备 2

3.2 细胞培养 2

3.3 测定调和茶对巨噬细胞 RAW264.7 增殖率的影响 2

3.4 亚硝酸钠标准制作 2

3.5 测定巨噬细胞RAW264.7 NO产量 2

3.6 测定巨噬细胞RAW264.7 iNOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的相对表达量 3

3.7 巨噬细胞RAW264.7蛋白印迹分析 3

4 结果与分析 4

4.1 新疆风味调和茶对巨噬细胞 RAW264.7 增殖率的影响 4

4.2 新疆风味调和茶对巨噬细胞 RAW264.7释放NO水平的影响 4

4.3 新疆风味调和茶对巨噬细胞 RAW264.7炎症基因表达及转录激活的影响 5

4.3.1 对iNOS表达量的影响 5

4.3.2 对COX-2表达量的影响 6

4.3.3 对TNF-α表达量的影响 7

4.3.4 对IL-1β表达量的影响 8

4.3.5 对iNOS、COX-2、TNF-α蛋白生成的影响 9

4.4 新疆风味调和茶对巨噬细胞 RAW264.7 MAPK的影响 10

4.5 新疆风味调和茶对巨噬细胞RAW264.7 NF-κB和AP-1的影响 11

5 讨论 12

结论 13

参考文献 14

致谢 15

1 引言

新疆风味调和茶^[1-5]中含有多种植物性原料，其中有些原料已经被证明具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抑菌、免疫调节等^[6-11]多种生物活性。天然产物免疫调节作用的机制是通过刺激体内多种巨噬细胞因子释放及补体系统激活来调节完成^[12]。因此，具有稳定功能活性的巨噬细胞RAW264.7被广泛应用于考察天然产物的免疫活性。一般认为，天然产物中的植物多糖能够激活巨噬细胞RAW264.7，提高其增殖活性，促进一氧化氮等活性因子的产生，并释放白介素家族(如IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12等)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)等细胞因子，从而调节巨噬细胞的免疫功能，并启动抗病毒和抗肿瘤的作用^[13]。

2 材料与仪器

2.1 材料

调和茶配方：印度豆蔻1.5 g、红花3 g、玫瑰花3 g、丁香0.3 g、薄荷2 g、小茴香1.5 g、甘草1 g、干姜0.3 g、姜黄0.5 g、茯砖茶15 g，购自安徽亳州。原料粉碎后过18目筛，混合均匀，置于干燥处保存。

2.2 试剂

亚硝酸钠、十二烷基硫酸钠（SDS）均购于国药集团化学试剂公司；SsoAdvanced SYBR Green Supermix购于伯乐生命医学产品(上海)有限公司；甲氮甲唑蓝（MTT）、二甲基亚砜、台盼蓝均购于 Sigma 公司；RPMI 1640培养基、胎牛血清购于Corning公司；RAW264.7鼠巨噬细胞来自ATCC (Manassas, VA, USA)。

2.3主要仪器

5810R 台式高速冷冻离心机(德国eppendorf公司)；

BT25S 分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；

Infinite M200 Pro 酶标仪(瑞士Tecan)；

Alpha 1-2 LD plus 真空冷冻干燥机(德国Christ公司)；

二氧化碳培养箱(日本SANYO公司)；

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