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摘 要

：近年来，随着生物技术的发展，转基因产品逐渐市场化，转基因产品的安全性也受到越来越多的关注，对于转基因产品而言，建立相应的监管制度和检测标准尤为重要。本研究以针对抗虫转基因作物进行检测，采用便捷快速的检测方法---试纸条法对待测样品进行田间粗筛，由于试纸条携带方便且价格便宜而被受欢迎。

关键词：转基因，作物，抗虫，试纸条法

Abstract: In recent years, with the development of biotechnology, genetically modified products are becoming more and more marketable, and the safety of genetically modified products has been paid more and more attention. For genetically modified products, it is very important to establish a corresponding regulatory system and testing standards.In this study, the insect-resistant genetically modified crops were tested using a rapid and convenient test method --- Dipstick method. The test strips were widely used in field coarse screening because of their convenience and low price.

Keywords:Transgenic, crop, insect resistance, strip test

目录

1 前言 5

2 材料与方法 5

2.1 材料来源及种类 5

2.2 材料与试剂 6

2.3 仪器与设备 6

2.4 检测方法 6

2.4.1 试纸条法 6

2.4.2 PCR检测 7

3 结果与分析 8

3.1 抽样结果 8

3.2 试纸条法检测待测样品 8

3.3 检测结果 9

3.4 荧光定量 PCR 检测 10

结论 11

参考文献 12

致谢 13

1 前言

转基因生物（Genetically Modified Organism，简称GMO）是指利用现代生物学技术，将特定的目标外源基因导入到目标受体生物中，使得受体生物体获得某种特定的性状，从而达到提高生物体某种特定性状的目的，这种携带外源基因的生物称为转基因生物^[1]。转基因食品（Genetically Modified Foods，简称GMF）是指以转基因生物为原材料加工而成的食品^[2]。

近年来，随着转基因技术的不断发展，转基因产品也逐渐商业化，与此同时，人们对转基因产品，特别是转基因食品的安全性也愈发关注。目前，转基因技术被广泛应用于农作物的改良，主要包括对水稻、玉米、小麦、油菜等的抗虫抗逆性改良^[3]。在此背景下，转基因安全检测方法和技术得到了迅速发展，目前转基因检测方法包含两个方面^[4]，分别是基于外源核酸成分的检测技术^[5]和外源表达蛋白靶标的检测技术^[6]。

对于转基因检测技术，每种方法各有利弊，基于蛋白质的检测方法主要包括酶联免疫和试纸条法。酶联免疫吸附技术^[7]是较为常见的一种通过外源基因表达的蛋白检测方法^[8]，该方法具有抗体抗原反应灵敏、特异性高、用时较短等优点，但是由于该方法干扰因素较多，致使检测流程较为复杂。免疫试纸条（Immunochromatography test strip, ICTS)是目前常用的快速检测方法之一^[9]。该方法源于上个世纪80年代初，该方法有效结合了层析法^[10]和免疫检测法^[11]的优点，具有操作简单、快速、样品需要量少、结果易观察、成本低、保存和携带方便等优点，非常适用于田间大规模筛查。

本实验通过对本地个县市区的大田作物进行随机抽样，采用转基因抗虫作物单一性性状快速检测方法^[12]，对淮安各县市区的田间样品进行抗虫性单一外源基因进行筛查，通过对待测样品的检测，为转基因产品种植现状提供理论依据。

2 材料与方法

2.1 材料来源及种类

供试材料主要包括水稻叶片样品16份、玉米叶片样品3份，所有供试材料均由陈桂敏老师取自淮安各县市区大田，具体取样地点如下图1所示。

水稻

图1. 供试材料田间取样分布图 玉米

2.2 材料与试剂

实验过程中使用到的阳性对照转抗虫小麦的粗粉颗粒以及抽提供试材料蛋白的高效提取液和检测外源蛋白的试纸条均购自中国农业科学院油料作物研究所基因工程与转基因安全评价研究室。

2.3 仪器与设备

高压灭菌锅、恒温干燥箱、eppendorf单道可调移液器、恒温水浴锅、研钵、研杵等

2.4 检测方法

2.4.1 试纸条法

本实验使用试纸条法对样品是否具有抗虫外源基因进行检测，实验操作步骤如下：

1. 选取大小适中的研钵、研杵并清洗干净。
2. 放入高压灭菌锅进行高压灭菌2小时，取出。
3. 放入恒温干燥箱干燥表面水蒸气约2小时后取出。
4. 取出高效提取液，放入恒温水浴锅中，待高效提取液彻底融化后备用。
5. 选取研钵、研杵各一个，放入阳性对照粗粉颗粒，并用eppendorf单道可调移液器移取1500μl高效提取液，添加至研钵中，研磨，放入试纸条后，静置15分钟，观察。
6. 选取一份待测样品，由于每份待测样品采用五点取样法，所以在每个取样点的同一个叶片上取三等份的约1平方厘米的小叶片，分别放在三个研钵中，做三个重复。
7. 并用eppendorf单道可调移液器移取1500μl高效提取液，添加至研钵中，研磨，放入试纸条后，静置15分钟，观察。
8. 将阳性对照、阴性对照、待测样品试纸条在吸水纸上放置1分钟，吸干水分，整齐放置于白纸上观察、对比、拍照。
9. 其余待测样品均按照此方法重复进行。
10. 清洗实验器材，将待测样品、高效提取液、试纸条、eppendorf单道可调移液器放回原处。
11. 使用高压灭菌锅将使用过的研钵、研杵灭菌2小时，取出。
12. 将研钵、研杵放入恒温干燥箱60摄氏度干燥2小时以去除表面水分，取出，放回原处。

2.4.2 PCR检测

由于快速检测试纸条的灵敏度相较于PCR来说相对较低，本实验通过试纸条法能够初步判定该19份待测样品中不含有目标外源抗虫蛋白基因，为了进一步验证试纸条检测的精确性，本研究随机选取4个待测样品通过定量的检测方法进行定性判断。

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