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摘 要

为获得白花紫藤花中抗氧化物质，分别用乙醇、70%乙醇、40%乙醇和水提取，采用多种抗氧化体系对所得提取物的抗氧化活性进行测定，结果表明70%乙醇提取物中的抗氧化活性最高。为获得提取物中抗氧化活性物质，利用在线高效液相色谱与铁离子还原/抗氧化能力法（HLPC-FRAP）和高速逆流色谱（HSCCC）进行分离纯化。通过HLPC-FRAP筛选一系列溶剂体系，根据抗氧化活性峰的分配系数得HSCCC分离的最优溶剂体系：正己烷：乙酸乙酯：乙醇：水体积比为3:4:4:5。通过HSCCC分离白花紫藤花70%乙醇提取物，收集相应馏分减压干燥，得70%乙醇提取物中一个高纯度的抗氧化物质，利用核磁共振仪鉴定得到物质5 ,7 ,3’,4’-四羟基黄酮。

关键词：紫藤花，抗氧化活性，HPLC-FRAP，高速逆流色谱

 

Abstract：In order to obtain the antioxidant substance in white wisteria flower,Four different solvents were used for extraction, The antioxidant activities of the extracts were determined by various antioxidant systems. The results showed that 70% ethanol extract had the highest antioxidant activity. To obtain the antioxidant active substance in the extract, the separation and purification were carried out by high performance liquid chromatography (HPLC), iron ion reduction/oxidation resistance method and high speed countercurrent chromatography (HSCCC). A series of solvent systems were screened by HLPC-FRAP, according to the distribution coefficient of antioxidant activity peak, the optimal solvent system was obtained by high speed countercurrent chromatography: n-hexane: ethyl acetate: ethanol: water volume ratio of 3:4:4:5. A high purity antioxidant substance was obtained from 70% ethanol extract of white wisteria wisteria by high speed countercurrent chromatography (HSCCC), followed by decompression and drying of corresponding fractions. Substances 5,7,3 ",4 "-tetrahydroxyl flavonoids were identified by NMR.

Keywords： wisteria，antioxidation activity，HPLC-FRAP，HSCCC

目录

1 引言 5

1.1 紫藤花 5

1.2 抗氧化物质研究现状 6

1.3 抗氧化活性测定 6

1.4 高速逆流色谱技术 7

1.5 本实验研究目的和意义 8

2 实验试剂和仪器 8

2.1 试剂 8

2.2 仪器与设备 8

3 实验方法 9

3.1 白花紫藤花提取物的制备 9

3.2 提取物抗氧化活性分析 9

3.2.1 DPPH自由基清除能力 9

3.2.2 FRAP铁离子还原能力 10

3.2.3 总还原力测定 10

3.2.4 总酚测定 10

3.2.5 总黄酮测定 10

3.3 HSCCC分离抗氧化物质方法 11

3.3.1 溶剂体系筛选 11

3.3.2 HPLC及HPLC-FRAP分析方法 12

3.3.3 抗氧化物质HSCCC分离 12

3.3.4 抗氧化物质鉴定 12

4 结果与分析 12

4.1 抗氧化活性分析 12

4.1.1 DPPH自由基的清除率 12

4.1.2 FRAP铁离子还原能力 13

4.1.3 总还原能力 13

4.1.4 总酚和总黄酮含量 14

4.2 HSCCC分离纯化抗氧化物质 15

4.2.1 FRAP法在线高效液相色谱法评估样品中抗氧化物质 15

4.2.2 HSCCC分离纯化条件的确定 16

4.2.3 HSCCC对目标物质的分离 17

4.2.4 HSCCC分离物质的鉴定 18

结 论 20

参考文献 21

致 谢 24

1. 引言

1.1 紫藤花

紫藤花（Wisteria sinensis）是著名的园林环保观赏性花卉，属于豆科紫藤属落叶木质大藤本，在我国华北、西北和长江流域诸省比较普遍。紫藤不仅是观赏植物，其具有很高的医疗和食用价值。紫藤花略带苦味和甜味，有利于水肿、消风、缓解疼痛。主治腹水浮肿，小便不利，关节肿痛和痛风等病症，拥有极高的潜在研究价值^[1]。多种研究表明，紫藤花含有挥发油、酚类、黄酮类、凝集素等多种具有生理活性的化学成分^[2]，如精油中的主要成分龙涎香精内酯、里哪醇、α-松油醇等^[3]；种子中提取出紫藤凝集素^[4]等。酚类和黄酮类成分是许多天然抗氧化剂中的主要有效成分，紫藤花中这些物质的存在说明其可能也有较强的抗氧化活性，但是现阶段对于紫藤花中的具有抗氧化活性的物质研究尚少，因此本实验主要研究紫藤花中的抗氧化物质并对具有抗氧化活性的物质提取分离，以其能用于医疗、食品、等领域。

• 1. 抗氧化物质研究现状

人类老龄化和食物腐败都是因为受到氧化作用的原因。氧化是物质失电子的过程，在这个过程中可以产生大量的自由基，由于自由基具有不稳定性，容易与周围的分子反应形成更多的自由基^[5]。而抗氧化物质能够减慢或者预防发生氧化作用的分子，能够清除自由基并且停止链反应，使自己受到氧化从而停止其他的氧化反应。目前，抗氧化剂主要有化学合成抗氧化剂和天然抗氧化剂两大类，但是现由于各类化学合成抗氧化剂的各种不稳定因素，使得科学家们将目光放在了从水果，蔬菜，花卉和绿植中筛选获得安全、有效的天然抗氧化物质上。

就目前阶段而言天然抗氧化物被广泛应用在食品、制药和化妆品等领域。在食品工业^[6]中，抗氧化物质主要会作为食品添加剂用来预防食品的腐烂变质，延长食品的保藏时间；在医药领域^[7]，天然的抗氧化物质还具有能够治疗心血管疾病、降压、抗肿瘤等药理作用；在化妆品工业中，由于缺乏抗氧化物质会使皮肤有一定程度的损伤，在外表方面体现为浅表细纹、皱纹的形成，使皮肤内部胶原蛋白和弹性蛋白的交联造成DNA损伤。

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