文 献 综 述

一、前言

　漆酶( laccase, EC11101312) 是一种含铜多酚氧化酶(polyphenol oxidases, PPO) , 它通过获得O₂催化邻对苯二酚、多酚、对苯二胺、抗坏血酸等物质的氧化, 使之生成相应的苯醌和水。1883年, 日本学者Yoshida^{[ 1 ]}首次从日本紫胶漆树(Rhus vernicif lua) 漆液中发现一种可催化漆固化过程的蛋白质; 1894 年Bertrand 将其命名为漆酶。由于它具有相当宽泛的底物专一性和较好的稳定性，漆酶在废水处理、生物漂白、芳香化合物转化、生物传感器构建等方面具有重要应用价值^{[ 2 ]}。目前，有许多资料也谈到了漆酶在食品加工中的应用，如漆酶在饮料加工、食药用菌生产、食品分子交联、植物食品保护等方面有重要作用^[1,3]。固定化技术就是近年来迅速发展的一种崭新技术，把固定化技术应用到酶制剂行业是该行业生产和使用酶制剂的又一次革命。

细菌漆酶与真菌漆酶结构相似，同样含有4个铜结合位点,但全序列却与真菌漆酶不同，所以其漆酶的反应条件及动力学特征就会与真菌漆酶不同。其反应速度可能会变慢，Cu² 可能成为必要元素，由于这些不同，细菌漆酶只能被称为#8220;多铜氧化酶#8221;或#8220;多酚氧化酶#8221;，其也被定义为漆酶类似物( lac2case2like) 。然而，细菌漆酶可能比真菌漆酶有更多的优点，如存在Cu2 抗性^{[ 4 ]} 、不需糖基化、热稳定性好^{[ 5 ]}及酶活性的最适pH 值范围广^{[ 6 ]}等。因此,细菌漆酶的研究对漆酶应用的环境条件和领域的扩展具有十分重要的意义。

纳米凝胶是由亲水性或两亲性高分子链组成的三维网状结构，它能显著的溶胀于水但是不溶解于水，由于水和凝胶网络的亲和性，水可能以键合水、束缚水和自由水等形式存在于高分子网络中而失去流动性，因此纳米凝胶能够保持一定的形状。它们可以作为一种药物载体，而且也可以通过盐键，氢键或者疏水作用自发的结合一些生物活性分子。高分子电解质的纳米凝胶可以稳定地结合带相反电荷的小分子药物和生物大分子，比如寡或多聚核苷酸（siDNA，DNA）和蛋白质。

二、漆酶的固定化

2.1 吸附法固定漆酶

孟庆强等分别用蒙脱石和高岭石固定漆酶。酶活性测定结果表明: 蒙脱石比高岭石固定漆酶的容量大。在添加相同数量漆酶的情况下, 蒙脱石能够固定漆酶的最大比率为77% , 而高岭石只有6%。其原因可能是蒙脱石的比表面积和阳离子交换率要比高岭石的大。另有报道^{[ 7 ]} , 用蒙脱石固定的漆酶比活力较游离酶高, 其原因还不明确。

2.2 结合法固定漆酶

Eupergit Ograve; C 是一种环氧活化的聚丙烯酸载体, 它被广泛用于酶的固定化。Gerd Hublik 等^{[ 8 ]} 报道, 将糙皮侧耳产粗漆酶采用共价结合法固定到Eupergit Ograve; C上, 在- 20 e , pH 值10, 且安息香酸浓度为10 mmol/ L时, 漆酶的稳定性最好, 活力回收率最高。将固定化酶装在层析柱内, 以1 mmol/L 的2, 6-二甲氧基苯酚-磷酸缓冲液( pH 值710) 循环洗脱, 20 h 后气相色谱检测没有发现2, 6-二甲氧基苯酚。所以漆酶用于去除环境污染物中的酚类化合物有着潜在的应用价值。刁颖辉等^{[ 9 ]}用交联聚乙烯醇经羧基化、酰胺化制成一种活性载体用于漆酶固定化, 发现固定化反应在40 e , 12 h效果最好, 反应的最佳pH 值为312。