文 献 综 述 1 基因敲除 基因敲除即通过一定的途径使细胞基因组中得某个特定的基因去除或使基因失去活性的技术，是基因打靶(gene targeting)技术的一种。

基因打靶，是20世纪80年代后期发展起来的现代分子生物学重要实验技术之一。

可应用于去除原核生物细胞、整合生物的生殖细胞、体细胞或干细胞基因组中的基因等。

下图是利用同源重组构建基因敲除动物模型的基本步骤 （以小鼠为例）： 1.1 Red重组系统 　　　即Red Recombination。

Red重组系统，传统的方法已引起错误的重组，而这些错误重组体比原来的菌株更具生长的优势[1]。

它依赖于λ噬菌体，可以直接利用含有同源臂的线性打靶DNA替换出目的基因，且重组效率高，避免了传统RecA重组的缺陷。

这个系统需要λ噬菌体的3个基因，exo、bet和gam，分别编码Exo、Bet和Gam这3个蛋白。

Exo和Bet蛋白引导重组置换，效率较传统方法高出几十倍[2]，Gam蛋白抑制大肠杆菌RecBCD核酸外切酶V的活性，从而外源的线性DNA不至于被立即降解掉，因此该方法目前广泛应用于原核生物的基因敲除[3]。

1.2 基因敲除中的打靶策略 　　　打靶载体通常都有两段和打靶目标位点两端同源的序列，中间一段不同源但是为目的序列，它带有某种药物筛选标记。

应用于基因打靶的载体构建策略通常有两种：（1）插人型载体（2）置换型载体。