原核显微注射中不同注射浓度DNA对转基因效率的影响任务书
2020-08-07 21:03:58
1. 毕业设计（论文）主要内容：
原核显微注射技术是利用显微操作系统和显微注射技术将外源目的基因直接注入到受精卵的原核中，使外源基因整合到受体细胞的基因组内，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体动物的子宫内发育，从而获得转基因动物，是制作转基因动物最常用的一种显微注射技术。影响原核显微注射效率的方面有很多，比如注射针的粗细，注射液DNA的浓度，受孕鼠的状态等而DNA的浓度是影响效率的主要因素，同时，其可控性高。所以得到原核显微注射中DNA的最适浓度区间是十分有必要的。通过查阅资料得知最适浓度位于1.0ng/ul-3.0ng/ul，毕业设计的主要目标是得到其最佳浓度，缩小区间，极大的提高转基因动物制作的效率。通过将三种不同DNA（PCAG-IRF1、PCAG-IRF2、PCAG-IRF3）注射到小鼠C57的受精卵中，其中每种DNA分别注射五个梯度浓度分别为1.0ng/ul、1.5ng/ul、2.0ng/ul，2.5ng/ul，3.0ng/ul，再将卵植入到待孕小鼠中；然后将三种DNA注射的结果进行对照，从而根据得到的转基因阳性率判断不同浓度对其效率的影响，最后选择最适注射浓度，极大的提高转基因动物制作的效率。
2. 毕业设计（论文）主要任务及要求
1、 查阅不少于15篇相关资料，英文文献不少于2篇，完成开题报告。
2、 确立原核显微注射中不同注射浓度dna对转基因效率的影响。
3、 完成不少于20000字符的英文文献翻译。
3. 毕业设计（论文）完成任务的计划与安排
| 第1-2周：了解论题，认识所需完成的主要内容和任务；搜集相关学术期刊、论文、文稿、专利、教材等资料，阅读后进行总结，对论题形成一个初步的系统性的认识。 第3-4周：完成毕业论文开题报告，确定实验技术路线，确定添置实验所需的材料、仪器和试剂。确定具体的实验方案和步骤。 第5-8周：开始试验，每天注射一种DNA的一个浓度，每种DNA的每个浓度注射两天。同时观察手术后受孕小鼠的状态，小鼠出生时观察母鼠和奶鼠的状态，尽量避免小鼠死亡情况的发生。 第9-13周： 通过pcr等试验检测出生小鼠的阳性情况的初步判定，用克隆测序进一步判断。同时继续观察未出生母鼠以及刚出生小鼠的状态，直至所有的小鼠全部鉴定完毕。
第14-15周： 总结实验过程中的各项数据和结果，进行分析；开始撰写毕业论文，建立论文框架，完成论文初稿。 第16周： 完成论文，交导师审阅、修改、定稿。 第17周： 准备论文答辩。
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4. 主要参考文献
[1]celebi c，guillaudeuxt，auvray p，et ai．the making of“transgenic spematozoa．” [j] biol reprod，2003．68：1477一1483．
[2]chan aw.transgenic animals：current and altemative strategies [j] cloning，1999，1：25—46．
[3]mullins lj，mullins jj． transgenesis in the rat and larger mammals[j]．j clin invest，1996，97：1557—1560.
