摘 要

背景：皮肤作为人体面积最大的器官，具有阻挡病原体和异物入侵、防止体液流失等重要的屏障保护作用以及感觉、维持机体内稳态、调节体温等一系列重要的生理功能。因此，皮肤无论受到何种损伤都必须及时修复，否则会造成创面的急慢性感染甚至是机体的功能紊乱。创伤修复是一个动态的涉及到多种细胞和细胞因子的复杂过程。胶原蛋白海绵为优良的组织工程支架材料，是最早被利用的生物材料之一。富血小板血浆（PRP）是一种自体血小板产物。经激活后可释放一系列高浓度的生长因子，能模仿自然愈合方式促进伤口愈合。已有大量文献证实胶原海绵及PRP在创伤修复方面的促进作用，但胶原蛋白海绵联合PRP在损伤修复中的作用鲜有研究。

方法：在本研究中，成功地利用Balb/c小鼠建立皮肤损伤模型。分别用PRP处理的胶原蛋白海绵及胶原蛋白海绵处理创面，并作为三维支架材料培养人角质细胞HaCaT。记录创面面积及细胞生长情况。结果：PRP处理的胶原蛋白海绵能加速创面愈合、促进细胞生长，效果均优于胶原蛋白海绵。结论：胶原蛋白海绵联合PRP能更好的促进创面愈合及细胞生长，应用PRP处理的胶原蛋白海绵处理创伤是一种优秀的处理创伤的技术方法。

关键词： 创面修复 PRP 胶原蛋白海绵

Abstract

Backgrounds Skin is the largest organ of the body, functioned to block pathogens and foreign matter invasion, to prevent the loss of body fluids, to maintain the body steady state, and to regulate body temperature and a series of important physiological functions. Therefore, timely wound healing is essential for the normal function of skin. Wound repair is a complex process involving a variety of cells and cytokines. Collagen sponge is an excellent scaffold material for skin tissue engineering. Platelet-rich plasma (PRP) is an autologous platelet product. After activation, PRP can release a series of high concentrations of growth factors, which can promote wound healing. A large amount of evidence has confirmed the promotion effect of collagen sponge or PRP in wound healing, but the role of collagen sponge combined with PRP in injury repair has not studied.

Methods At the present study, skin injury model was successfully established in Balb/c mice. The PRP-treated collagen sponge and collagen sponge were used to treat the wounds respectively，and used as three - dimensional scaffold to culture human keratinocytes HaCaT. Record the wound area and cell growth. Result The PRP-treated collagen sponge can accelerate the wound healing, promote cell growth, the effect is better than collagen sponge. Conclusion Collagen sponge combined with PRP can better promote wound healing and cell growth than collagen sponge，and the use of PRP-treated collagen sponge to treat trauma is an excellent technique for handling trauma.

Keywords：Wound healing Platelet-rich plasma (PRP) Collagen sponge

目录

第1章 绪论 1

1.1 皮肤及创伤愈合 1

1.2 创面敷料 1

1.3 PRP 2

1.4 研究背景 4

第2章 胶原蛋白海绵及PRP制备 5

2.1 胶原蛋白海绵的制备 5

2.1.1 试剂 5

2.1.2 仪器 5

2.1.3 操作步骤 5

2.2 PRP的制备 5

2.2.1 试剂及仪器 6

2.2.2 实验步骤 6

第3章 胶原蛋白海绵联合PRP促进创面愈合 7

3.1 实验材料 7

3.1.1 实验动物及饲养条件 7

3.1.2 实验药品及试剂 7

3.1.3 实验器材 7

3.1.4 药品配制 7

3.2 小鼠皮肤创伤模型 7

3.2.1 麻醉小鼠 7

3.2.2 皮肤创伤模型制作 8

3.2.3 创面处理 8

3.2.4 皮肤病理切片 8

3.3 HaCaT角质细胞生长情况 9

3.3.1 解冻细胞 10

3.3.2 实验准备 10

3.3.3 HaCaT角质细胞3D培养 10

第4章 结果及讨论 11

4.1 实验结果 11

4.1.1 伤口处理及愈合状况 11

4.1.2 愈合曲线 11

4.1.3 病理切片 12

4.1.4 HaCaT细胞培养 13

4.1.5讨论 13

参考文献 14

致 谢 16

第1章 绪论

1.1 皮肤及创伤愈合

皮肤覆盖于人体表面，是人体最大的器官。同时也是人体最重要的代谢器官，它由表皮、真皮及皮下组织构成。它是人体的第一道防线，使体内各种组织器官免受物理性、化学性、机械性及病原微生物性的侵袭，是外部的感觉传感器并参与体温的调节过程，进行新陈代谢及免疫应答。在日常生活及工作过程中，皮肤不可避免地会遭受到各种创伤，当创伤面积较小、深度较浅时可通过创伤自然愈合迅速恢复，但当创伤面积较大、深度较深时创伤就难以在短时间内恢复，皮肤无法行使正常的生理功能，影响人的日常生活并存在伤口感染的隐患。

创伤愈合是指外伤或其他疾病过程中，造成组织损伤后局部组织通过增生或再生的方式进行修复的一系列复杂但有序的病理过程^[1],促进创面愈合是治疗皮肤损伤（烧伤、外伤等）的根本任务。随着科学技术的不断发展及分子生物学、组织工程学等方面研究的不断深入，创伤愈合研究、应用水平得到了很大的提升。创伤愈合的目标也由追求愈合速度逐渐变为重视恢复质量，关注创伤组织功能恢复的问题。创伤处理也由早期的简单物理清创后使用传统敷料处理发展为物理清创、化学清创^[2]及生物清创等适时使用一种或多种方法处理创面并辅以药物及新型敷料处理创伤，加速愈合过程，避免瘢痕等的产生，促进创伤组织功能的恢复。此外随着干细胞技术及生物学、医学的迅速发展，通过调控并诱导干细胞的增殖分化以促进创伤愈合的研究也在不断进行。