论文总字数：9400字

摘 要

瓜蒌作为传统的中医药之一，具有较好的药理活性，故对活性成分进行分离纯化、结构鉴定及活性测试将有着重要的应用价值。本论文通过水提醇沉法提取瓜蒌皮多糖，利用凝胶色谱柱对它的其进行分离、纯化，得到两个化合物，命名为SK-10和SK-12。分子量分别为SK-10: 278、SK-12: 180。活性测试结果表明，SK-10具有较强的细胞毒活性，SK-12具有较强的免疫调节活性。

关键词：瓜蒌皮，多糖，分离，纯化，活性测定

Abstract: As one of traditional Chinese medicine, snakegourd fruit has good pharmacological activity, so it has important practical value to isolate, structure identification and activity test of its active ingredient. Here we have isolated and purified two compounds，named SK-10 and SK-12 by using Water extraction and alcohol extraction method of Polysaccharides and gel filtration chromatography. The molecular weight of SK-10 and SK-12 is 278 and 180, respectively. The activity test showed that SK-10 has a strong cytotoxic activity and SK-12 has a strong immune regulatory activity.

Key words: Snakegourd fruit skin, polysaccharide, separation, purification, determination of activity

目录

1 前言 5

1.1 植物多糖的研究进展 5

1.2 植物多糖的提取纯化 5

1.2.1 植物多糖的提取 5

1.2.2 植物多糖的分离 6

2 瓜蒌的研究状况 6

3 瓜蒌皮多糖的提取 7

3.1 材料 7

3.1.1 主要材料 7

3.1.2 主要试剂和仪器 7

3.2 瓜蒌皮多糖的提取方法 7

4 瓜蒌多糖的分离与纯化 8

4.1 试剂和仪器 8

4.2 分离纯化的主要方法 8

5 结果与讨论 8

5.1 SK-10和SK-12核磁共振及质谱数据 8

5.2 SK-10和SK-12活性测试结果 13

5.3 讨论 14

结论 15

参考文献 16

致 谢 18

1 前言

植物多糖也叫做植物多聚糖，是一种在植物生长活动过程中细胞产生的化合物。它一般由10个或更多个单糖聚集组成。 通常情况下植物多糖由100个左右有时甚至多达几千个单糖基以α-或β-糖苷键形式构成，是形成生命体重要的构成物质之一^[1,2]。在性质方面，植物多糖与组成它的单糖具有较大的差异。我们可以根据多种标准将它们进行不同的分类。根据它的功效将其分为两类：其一是给植物提供支撑和保护作用的多糖，如纤维素；其二是给植物提供营养，如淀粉，菊糖等。我们还可以将多糖分为杂聚糖和同聚糖；或者分为支链多糖和直链多糖；化学性质呈酸性则为酸性多糖，中性则为中性多糖。

1.1 植物多糖的研究进展

植物多糖是一种高分子聚合物，属于天然物质，广泛运用于抗肿瘤事业，而对人体的伤害较小。植物多糖具有不同的生物活性，在机体生理代谢的过程中具有无可替代的作用，它能够调节机体免疫系统、抑制肿瘤的产生、延缓机体衰老、降低人体血糖及血脂、抵抗外来辐射、抵挡细菌、抗击体内病毒等生物活性^[3-6]。

多糖除了免疫调节作用、抗氧化作用、抗肿瘤作用、降糖降脂作用、抗微生物作用，还有其它的一些作用，比如说对胃溃疡的防治有非常好的效果，可以降血脂活性，增强个体的造血能力，提高胶原蛋白的合成，甚至具有美容美白的效果等。

随着人们对植物多糖研究的逐步深入，凭借其独特的活性和天然的来源，使其在维持人类健康的生活中占有着越来越重要的地位。更多的生物活性被发掘，使其应用的范围也越来越广阔。但由于多糖自身结构的复杂，导致我们在提取分离纯化以及测定它的性质时产生巨大的困难，这需要研究者们共同寻找相关解决办法，克服这些困难，让植物多糖的研究进入一更深的层次。

1.2 植物多糖的提取纯化

1.2.1 植物多糖的提取

由于多糖在不同植物中的位置大致相同，在提取的过程中，我们首先要破除细胞壁，有机械法和非机械法这两种方法。机械法分为冻融法、压榨法、研磨法和组织捣碎法，非机械法分为生物酶降解法、化学法。根据细胞破壁的方法我们又衍生出提取植物多糖的方法，大致分为三类：化学方法、物理方法和生物方法。化学方法包括溶剂提取法、酸提法、碱提法^{[7, 8]}；物理方法有超滤、超声提取、微波提取^[9]；生物方法为酶提、CO₂超临界萃取等。

1.2.2 植物多糖的分离

至于多糖纯化即通过物理化学方法将多糖中的杂质剔除，以便得到单一的无其他物质干扰的多糖组分。首先是去除非多糖的物质，比如蛋白质、色素和小分子盐类等杂质，然后对多糖进行分级、纯化。

通常被用来去除多糖中蛋白所采用的方法有：Sevage法^[10]、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸^[11]法。这些方法的原理是除蛋白质以外的物质不与溶剂发生反应而蛋白质会沉淀积累，进而将蛋白质分离去除，达到除蛋白的目的。

色素是由于植物的粗提物具有酚类化合物，在空气中被氧化生成的。而我们对多糖进行分析和鉴定时，色素会对结果产生影响，于是我们要将多糖中的色素除去。通常我们去除色素的方法有：利用硅藻土、活性炭等将色素吸附进而去除，使用过氧化氢将色素氧化，还有其它一些方法^[12,13]。

要想提高多糖的纯度，我们就需要去除小分子杂质。常用的方法有透析法，操作简单，但缺点也显而易见，往往一次操作需要2-3天，而且因为需要防止常温霉变，在必要时，常常需要添加防腐剂。随着膜分离技术的发展，纤维滤器透析法也逐渐成为去除多糖小分子物质的主流方法。依赖于膜孔径的不同尺寸将大小不一的分子逐级分离出来，因为它生产周期短，分离条件温和，为业界人士所青睐，成为多糖去除杂质的一条崭新的道路。

2 瓜蒌的研究状况

瓜蒌就是常说的栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim.)它在不同的地方有不同的名字，比如在乐清它叫做苦瓜、在温州文成叫吊瓜、温州人常叫它老鸦瓜。它的种子含有亚油酸、不饱和脂肪酸、维生素和许多微量元素，有很高的营养价值；果实含三萜皂苷、有机酸、氨基酸、糖类、色素^[14]；根又叫天花粉，含有蛋白质、皂苷、酸类。它在我国许多地方都有种植，是传统的中药之一。并且经济价值高，一次引种，多年收益，籽还能制成吊瓜子出售。瓜蒌皮就是栝楼长熟以后果实外面包裹的一层皮^[15]，人们喜欢称它为瓜壳，具备滋润肺部、化解淤痰、顺理心气等作用。日常的发烧咳嗽、咽喉肿痛、口舌干燥、吐血、便秘、痈疮肿毒等也都可以用它进行治疗^[16]，并且毒性比西药小的多。对它的研究主要是在药理方面^[17]。例如，在心血管系统方面，瓜蒌皮用水煎煮^[18]过后的汁水能够在一定程度上抑制因药物引起的心律失常现象的产生。在消化系统中，若产生积食，就可以用瓜蒌进行治疗。因为瓜蒌中有致泻物质的存在，能使人腹泻。瓜蒌皮中致泻物质含量少所以作用不明显；瓜篓仁因为含有大量脂肪油所以致人腹泻的能力更强；相比皮和仁，瓜蒌霜使机体腹泻的能力较为缓和。此外，瓜蒌还具有抗菌作用。实验表明，瓜蒌煎煮或浸泡后的汤汁对人体革兰阴性肠内致病菌，对葡萄球菌、肺炎双球菌、流感杆菌等均有抑制作用^[19]，而且对诱发皮肤病的真菌也有抵抗作用，但对腹水癌的药效不明显。虽然对瓜蒌的药理活性研究很多，但对其多糖含量及成分的研究还远远不足^[20]。通过对瓜蒌皮多糖的分离纯化及活性测定，为它的进一步研究提供理论基础。

3 瓜蒌皮多糖的提取

3.1 材料

3.1.1 主要材料

瓜蒌

3.1.2 主要试剂和仪器

试剂：葡萄糖，氯仿，石油醚，正丁醇，双氧水，95%乙醇，苯酚等

仪器：多功能粉碎机，恒温水浴锅，DEAE-纤维素，离心机，透析袋，分光光度计等

3.2 瓜蒌皮多糖的提取方法

将瓜蒌皮洗净、切碎、烘干后，利用多功能粉碎机粉碎过筛。

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